На контрасте: Тетрадь предметная для сочинений Проф-пресс На контрасте А5 48 листов — Главная

Содержание

На контрасте — Westwing Интерьер & Дизайн

Текст: Ксения Вешнева Фото: Кирилл Овчинников
© 2012 Westwing Интерьер & Дизайн

На контрасте

Сначала декоратор Евгения Лед сомневалась, стоит ли браться за этот проект, так как любит сама проектировать пространство. Молодая пара предложила ей оформить интерьеры уже готового дома, планировка которого была далека от совершенства и сразу ограничивала возможности. Но хозяева оказались настолько приятными, а их представление о том, что хотелось бы сделать настолько близкими взглядам Евгении, что она все-таки согласилась и ни разу об этом не пожалела. Конечно, чтобы скорректировать недостатки пространства, она не удержалась и «подвинула» пару стен. Потому что считает, что строить композицию из предметов следует только по осям, продумывая каждый вид уходящей перспективы. В результате, на первом этаже получились холл и анфилада парадных комнат – кухня, столовая, гостиная. Из столовой с восьмью огромными окнами открывается прекрасный вид на сосновый бор, окружающий дом.

У хозяина, много путешествующего по Европе и видевшего хорошие образцы классических интерьеров, особенно французских, было три четких желания. Во-первых, покрасить стены кухни в насыщенный красный цвет, во-вторых, положить на полу первого этажа белую плитку с черными вставками ромбикам на голландский манер, и в-третьих, сделать в ванной комнате деревянный пол. Да и еще – никакого блеска и стекла. Евгения, как золотая рыбка, исполнила все пожелания заказчика. И первое было самое сложное.

Оттенка, который представлял в своем воображении заказчик, не было ни на одной цветовой раскладке и ни у одного производителя красок. Тогда Евгения взяла палитру, воспроизводящую цвета старых английских красок, и начала их смешивать, повинуясь своей интуиции. Поиски были долгими, но, в конце концов, среди десяти образцов, сделанных декоратором, один оказался идеально подходящим.

Чтобы уравновесить яркий цвет кухни, которая хорошо просматривается из гостиной и столовой, в столовой Евгения решила повесить шторы такого же оттенка. После долгих поисков, ткань нужного оттенка нашли почти чудом в одной английской компании. Каким-то невероятным образом оказалось, что этот же оттенок присутствует на портрете женщины в красном платье, который купили хозяева во время путешествия. Картину декоратор немедленно повесила в холле. С ней связана отдельная интересная история.

Когда хозяева, уже позже, познакомились с автором портрета художником Владимиром Волеговым, выяснилось, что на портрете изображена его жена, которая очень похожа на хозяйку дома. А еще из путешествий молодые привезли антикварное кресло с резной деревянной спинкой и сине-белой обивкой. Синий цвет стал вторым цветовым акцентом после красного. Эти два оттенка декоратор продолжала повторять небольшими репликами по всему первому этажу. Особенно на чехлах для подушек, которые она всегда делает яркими и нарядными. «Мне нравится обивку кресел и диванов, а также покрывала, делать нейтрального цвета – бежевого или серого – и из простых материалов типа льна, – делится своими секретами Евгения, – а вот подушки к мебели уже подбирать из шелка, бархата или дамаска ярких цветов.

Так получаются интересные контрасты текстуры и цвета. К тому же это практично, ведь подушки можно всегда поменять и все будет выглядеть по-другому».

Евгения знает еще один способ сэкономить. Например, в холле стоит замечательный расписной комод, о котором никогда не подумаешь, что он из Икеи. Несколько таких предметов для этого дома декоратор оформляла вместе с художницей Натальей Турыгиной, которая делает росписи по дереву.

Отдельные детали и предметы Евгения принципиально выбирает только самого лучшего качества и только из натуральных материалов. Прежде всего, это лепнина, которая, по мнению Евгении, должна быть исключительно из гипса. Только так она будет выглядеть по-настоящему благородно. Каминные порталы в гостиной и спальне хозяев сделаны из мрамора – никакой бутафории здесь не допускается. Люстры для интерьера декоратор подобрала пышные, с хрустальными подвесками – либо антикварные, либо очень хорошие современные реплики.

Основной прием, на котором построен весь интерьер, это контраст между классической мебелью и современной, между цветом и фактурой. Ушастые кресла у камина рядом с современными торшерами, минималистские прикроватные тумбочки и антикварные настольные лампы на них, плазменный экран телевизора на фоне обоев с дамасским орнаментом. Сочетание, казалось бы, несочетаемого, столкновение разных стилей привлекает и привносит в интерьер интригу. «Ведь так гораздо интересней, интерьер наполняется историей, как будто он создан не с нуля, а собирался годами», – говорит декоратор Евгения Лед. И хозяевам это очень понравилось!

Любимые приемы декоратора Евгении Лед

1. Использовать только настоящую гипсовую лепнину.

2. Вешать нарядные люстры с хрустальными подвесками, либо антикварные, либо реплики со старинных образцов и ставить крупные торшеры.

3. Красить маленькие помещения в темные насыщенные цвета

4. Повсюду ставить живые цветы и растения, в красивых кадках и вазах, чтобы дом дышал зеленью.

5. Клеить обои на одну стену или обклеивать ими всю комнату. Особенно если они в полоску.

6. Играть на контрасте фактур, текстур и цветовой гаммы – соединять блестящее с потертым, светлое с темным.

7. Смешивать классические и антикварные предметы с абсолютно новыми и современными.

http://www.ice-decor.ru

На контрасте

Не так много матчей осталось до конца первого круга, чтобы терять очки. Команды должны выкладываться в любое время и любую погоду. Тем, кто пришел в воскресенье на «Политехник», это будет интересно.

22.10.2017, воскресенье
СК «Политехник», ул. Политехническая, д. 27
Премьер-лига

Итальянский нрав
«Сассуоло» (СПбГУ) – «Банк`а» (МБИ) 3:2

Когда лидеры теряют очки…теряют они их как раз-таки на «итальянцах». В этом сезоне какой-то итальянский бес вселился в «Сассуоло», и теперь они не обращают внимания на то, кто перед ними – фаворит или аутсайдер. Правда, то, что они творили в матче с «Банкой» было интересно лишь в первом тайме. Расслабленность или еще что позволили «банкирам» сравнять счет в привычной им манере. Но, мамма мия, после второго пропущенного мяча «универсанты» тут же вышли вперед, а игра приобрела открытый характер – забить стремились обе команды. «Итальянцы» устраивать себе нервную концовку не хотели, но забить еще не смогли. Впрочем, как и их соперник. По крайней мере выявили сильнейшего.

Трансформация
«Банк`а» (МБИ) — «Луки-спорт» (НГУ им. Лесгафта) 4:7

Спортивный принцип: «Не забиваешь ты – забивают тебе». Классика. До определенного момента второго тайма все шло гладко для «банкиров». Они вели, на воротах соперника стоял полевой, запасные в команде были, все лидеры на поле. И тут наступила какая-то расслабленность: «Банка» упустила несколько хороших моментов и получила голы в ответ. 4:2 превращаются в 4:4, и тут «банкиры» уже не в силах сдержать разбушевавшихся «лесгафтовцев».

Ошибки на ровном месте, неубедительная игра в отборе – и счет начинает расти в пользу «синих». Победа осталась за ними, это стало понятно еще за три минуты до финального свистка, когда игровые проблемы «Банки» переросли во внутрекомандные перепалки.

Ярость Яры
«Bonch FC» (СПбГУТ) – «Империал» (НГУ им. Лесгафта) 5:6

Кто бы мог подумать, что после победы над «Союзом» и пента-трика Геращенко «связисты» проиграют аутсайдеру и прямому конкуренту за выживание. Только тот, кто знал состав «Империала». «Яра приехал, Яра сегодня будет, Ярославцев пригнал»… Почти как в «Бесприданнице» Островского. И как раз-то барин и стал тем фактором, который затмил фактор Геращенко. Даже после его феноменального штрафного с левой. Плюс ко всему, присутствие Копейкина заметно повысило атакующий потенциал «Империала». В целом равная игра завершилась победой тех, кто этого большего хотел, а именно – Ярославцева, приезжающего на игры только по праздникам.

Свои против Костина
«Империал» (НГУ им. Лесгафта) – «Shadows» (НГУ им. Лесгафта) 3:5

Но вот помочь своей команде одолеть «теней» Никита уже не смог. Даже счет 3:1 после первого тайма в пользу «Империала» не выглядел тем преимуществом, которое позволило бы провести второй отрезок встречи спокойно. Наконец-то обрел уверенность Костин, завершивший почти все свои моменты забитыми мячами. Может, так повлиял уход Василенко к середине второго тайма, но удержать даже ничью «Империалу» не удалось. Капитуляция перед командой Пимченко, который может уж точно быть доволен концентрацией его коллектива в матче.

Все ближе холод и все ближе концовка сезона. И чтобы не замёрзнуть придётся устраивать поистине горячие поединки!

Автор: Линар Хазиев

Letra de На контрасте de Alphavite feat. Майти Ди

Твоя тёлка — корова. Ты решил, что ковбой Твой папа — мент. Мне дело сшил, как портной Уличный пёс, потому что старше был брат твой

Но скоро мультики, и мы поспешили домой Тут продажа травки — бизнес план, е Тут продажа травки — в жизни «план Б» Надежда не проходит краш-тест Kick fleet, мы перевернули ваш крест, е Они видят наши лица. Камеры врубаются при мысли поживиться, аха Видел у твоей девицы тату бабочки и позже пояснился, поясница И за «пять с плюсом» меня бросает в чувства Мои глаза влюбились, мои глаза ебутся Грязь на трусах, был вот такой вкусный Что она хотела там перетаснуться Грамм дряни, сука пляшет кан-кан в капкане Как Скарлет на экране, пиздато играет Шаран, ведь у меня карма в кармане Детка, заткнись, мне поебать, чё они базарят Они разевают пасти. Думают так выглядят опасней Не-не, я буду играть на контрасте. Я буду играть на контрасте Громкие дела проворачивать Никем не раскрученная, сам кручусь как вихрь Да-да-да, я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте Да-да-да Я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте Майти Ди — голос улиц.

Пацан и не рисуюсь Я видел это, видел то, и это полный пиздец Пока ты гривой махал и думал, как кинуть лоха Чтоб семья ходила в мехах. Я сыграю не с экраном Мы тут в кости не сыграем. Вас ограбят как ебланов Я не Дикий Ди, но смысл одинаков Либо плати, либо иди нахуй Я кусок дерьма, ведь я всегда под мухой Я всегда на взводе, хоть я и не нюхал И как всегда кидает деньги на ветер Эти дети пиздят, но в инэте все дети Я в лучшей форме, ведь играю за Одессу На связи Алматы — Москва, выкупай мой стэм Мне похуй, я начал вещать Натянул планету на хуй и начал вращать Они разевают пасти, думают так выглядят опаснее Не не, я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте Громкие дела проворачивать Никем не раскрученная, сам кручусь как вихрь Да-да-да, я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте Да-да-да Я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте Я буду играть на контрасте

На контрасте: Рики Мартин от скуки осветлил бороду

https://ria. ru/20210123/martin-1594206372.html

На контрасте: Рики Мартин от скуки осветлил бороду

На контрасте: Рики Мартин от скуки осветлил бороду — РИА Новости, 23.01.2021

На контрасте: Рики Мартин от скуки осветлил бороду

Пуэрториканский поп-музыкант Рики Мартин неожиданно сменил имидж, обесцветив бороду. Своим преображением двукратный обладатель премии «Грэмми» поделился в… РИА Новости, 23.01.2021

2021-01-23T05:44

шоубиз

рики мартин (энрике моралес)

блондинки

звезды

знаменитости

стиль жизни

имидж

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/01/16/1594206941_0:0:3000:1688_1920x0_80_0_0_868fcb0cc03d998f5d2e9b85d4f43cb9.jpg

МОСКВА, 23 янв — РИА Новости. Пуэрториканский поп-музыкант Рики Мартин неожиданно сменил имидж, обесцветив бороду. Своим преображением двукратный обладатель премии «Грэмми» поделился в Instagram. На селфи музыкант позирует на фоне пляжа. Он строго смотрит в объектив и демонстрирует контраст между темными и светлыми волосами. В подписи к фото он намекает, что покрасился от скуки.И хотя в Daily Mail отмечают, что исполнитель хитов «Livin’ la vida loca», «She bangs» и других стал похож на Санта-Клауса, многим поклонникам и друзьям смелый образ 49-летнего музыканта понравился.»Вот это да!» — восхитился Джван Йосеф, художник и супруг Рики Мартина. «Блондином быть веселее», — считает манекенщик Джереми Кост. «Вот как выглядит моя борода, когда я ее не крашу ее», — пошутил актер Джесси Тайлер Фергюсон.В ноябре прошлого года стало известно, что Мартин вошел в число кандидатов на премию «Грэмми». Он поборется за награду в номинации «Лучший латинский поп-альбом» со сборником «Pausa».

https://ria.ru/20210119/vorobev-1593506387.html

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2021

РИА Новости

internet-group@rian. ru

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdnn21.img.ria.ru/images/07e5/01/16/1594206941_343:0:2770:1820_1920x0_80_0_0_96d816ba66a8b7802eac582d041724f2.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

рики мартин (энрике моралес), блондинки, звезды, знаменитости, стиль жизни, имидж

контраст_1 существительное — определение, изображения, произношение и примечания по использованию

[исчисляемое, неисчислимое] различие между двумя или более людьми или предметами, которые вы можете ясно видеть, когда их сравнивают или помещают близко друг к другу; факт сравнения двух или более вещей, чтобы показать различия между ними
- Эти два города представляют собой интересный контраст.
- контраст между А и Б Существует очевидный контраст между культурами Востока и Запада.
- Напротив, юг пострадал от ураганов очень мало.
- в отличие от кого-то / чего-то Ситуация, когда мы приехали, резко контрастировала с новостями.
- Бедность ее детства полностью контрастирует с ее жизнью в Голливуде.
- Компания потеряла 7 миллионов долларов в этом квартале по сравнению с прибылью в 6,2 миллиона долларов годом ранее.
- контраст с кем-то / чем-то, чтобы показать резкий / резкий / разительный контраст с чем-то
- контраст с чем-то Шерстяная куртка дополняет шелковые брюки и обеспечивает интересный контраст текстуры.
- по контрасту Когда вы смотрите на их новую систему, наша по контрасту кажется очень старомодной.
- контраст A и B Тщательный контраст двух планов показывает некоторые важные различия.
Языковой банк Contrastcontrast Выявление различий
- - В этом исследовании подчеркивается ряд различий в том, как мальчики и девочки-подростки в Великобритании проводят свое свободное время.
- - Одним из основных различий между девочками и мальчиками, принимавшими участие в исследовании, было то, как они используют Интернет.
- - В отличие от девочек, которые используют Интернет в основном для связи с друзьями, мальчики, опрошенные в этом опросе, обычно используют Интернет для компьютерных игр.
- - Девочки отличаются от мальчиков тем, что они тратят больше времени на общение с друзьями по телефону или в социальных сетях.
- - По сравнению с мальчиками, девочки проводят гораздо больше времени, разговаривая с друзьями по телефону.
- - В среднем девушки проводят четыре часа в неделю, разговаривая с друзьями по телефону. Напротив, очень немногие из мальчиков тратят более пяти минут в день на такие разговоры со своими друзьями.
- - Мальчики предпочитают соревновательные виды спорта и компьютерные игры, в то время как / в то время как девочки, кажется, предпочитают более совместные действия, такие как покупки с друзьями.
- - Когда девочки ходят по магазинам, они в основном покупают одежду и косметику.Мальчики же предпочитают компьютерные игры или гаджеты.
языковой банк в целом, проиллюстрирую, пропорционально, точно так же удивительно Дополнительные примеры
- Компания потеряла 13 миллионов долларов в этом году по сравнению с прибылью в 15 миллионов долларов в прошлом году.
- Контраст между сестрами был очень сильным.
- Контраст между сестрами был поразительным.
- Цветы контрастируют с темным фоном.
- Свежие фрукты контрастируют с насыщенным шоколадным пудингом.
- Автор подчеркивает контраст между традиционной и альтернативной медициной.
- Когда вы смотрите на их новую систему, наша по контрасту кажется очень старомодной.
- Их отношение к браку резко отличается от отношения их родителей.
- Существует резкий контраст между жизнью богатых и бедных.
- Между работами двух художников существует разительный контраст.
Oxford Collocations Dictionary прилагательное глагол + контрастное предложение
- по контрасту
- по контрасту
- по контрасту с
- …
фраз
- по контрасту с кем-то / чем-то
Смотреть полную запись
[исчисляемый, обычно единичный] контраст (для кого-то / чего-то) человека или вещи, которые явно отличаются от кого-то / чего-то еще
- Работа, которую вы сделали сегодня, сильно контрастирует (= намного лучше / хуже чем) тому, что ты сделал на прошлой неделе.
Дополнительные примеры
- Эта напряженная общественная жизнь полностью контрастировала с его прежней тихой жизнью.
- Ее волосы были черными, потрясающе контрастировавшими с ее бледным цветом лица.
Оксфордский словарь словосочетаний прилагательное глагол + контрастпредложение
- по контрасту
- по контрасту
- по контрасту с
- …
фраз
- по контрасту с кем-то / чем-то
См. Полную запись
[бесчисленные] различия в цвете или в свете и в темноте, используется в фотографиях и картинах для создания особого эффекта.
- Художник мастерски использует контраст.
Темы Цвета и формыc1, Artc1
[бесчисленное множество] количество разницы между светом и темнотой на фотографии или изображении на экране телевизора
- Используйте эту кнопку для регулировки контрастности.
Темы Телевидение, радио и новости2

Word Originlate 17-го века. (как термин в изобразительном искусстве, в смысле «сопоставлять, чтобы выявить различия в форме и цвете»): от французского contraste (существительное), contraster (глагол), через итальянский от средневекового латинского Contraare, от латинского contra- ‘ против «+ пристально смотреть».

См. Контраст в Oxford Advanced American Dictionary См. Контраст в Oxford Learner’s Dictionary of Academic English

Update in Contrast-Enhanced Ultrasound — FullText — Visceral Medicine 2020, Vol. 36, № 6

Абстрактные

Справочная информация: Целью современной медицины является безопасная классификация болезней для успешной терапии без инвазивных мер. Сонография, компьютерная томография (КТ) и магнитно-резонансная томография (МРТ) — эффективные методы визуализации.Однако без контрастного вещества информативная ценность трех нативных методов ограничена. Преимущества сонографии: отсутствие радиационного облучения или ранее известных физически вредных взаимодействий с тканями, пропорциональное исчезновение риска контрастного вещества, отсутствие (вероятно, необратимых) отложений контрастного вещества и отсутствие риска почечной недостаточности. Но достаточно ли этого, чтобы конкурировать или даже превосходить КТ и МРТ? Резюме: В этом обзоре представлено современное состояние технологии ультразвукового исследования с контрастным усилением (CEUS) в брюшной полости.К сожалению, замечательные диагностические возможности могут быть продемонстрированы здесь только на небольшом количестве впечатляющих типичных тематических исследований, подкрепленных литературой, так что, с собственной точки зрения, весь спектр CEUS может быть использован им самим или инициирован. В рамках физики динамика CEUS в реальном времени позволяет делать выводы, так что с современной технологией сонография, включая контрастное расширение, может считаться более совершенной по сравнению с другими методами визуализации. CEUS нередко имеет значение контрольного и эталонного метода. Ключевые сообщения: Сонография очень часто дает надежную диагностику. Введение контрастного вещества в сонографию привело к качественному скачку, аналогичному таковому в других методах визуализации. Уже изначально представление динамических событий в реальном времени приводит к определенному превосходству, то есть к полному наблюдению за фазами притока и оттока контрастного вещества и результирующей диагностике; Варианты тканеспецифической дифференциации обеспечивают уникальный аргумент в пользу продажи. Другими преимуществами метода визуализации первого выбора являются: отсутствие лучевой нагрузки, повторяемость исследования в любое время, местная независимость, незначительный уровень аллергии по сравнению с контрастными веществами других методов и отсутствие воздействия на почки и щитовидную железу. или исключенные депозиты.

Введение

Эхоконтрастная сонография (УЗИ с контрастным усилением; CEUS) превратилась в узкоспециализированную область медицинской диагностики. Как и в случае с компьютерной томографией (КТ), введение контрастных веществ в сонографию произвело революцию в диагностической точности. В руках экспертов по ультразвуковым устройствам с аппаратным и программным обеспечением, поддерживающим CEUS, CEUS считается лучше других методов визуализации, которые часто загрязняют многие системы органов радиацией.Уникальным преимуществом методов визуализации является представление в реальном времени характеристик притока и оттока контрастного вещества в ткани. Это часто характерно и близко к неинвазивной гистологической дифференциации. Используемое контрастное вещество является чисто внутрисосудистым агентом, не взаимодействующим с щитовидной железой или почками. У него явно самый низкий уровень аллергии на контрастные вещества [1]. Эта статья предназначена для всех, кто хочет использовать ценность этого метода в контексте своих собственных диагностических стратегий посредством целенаправленного инициирования обследования CEUS.

Сонография B-Scan: основа CEUS

Экзаменатор генерирует новаторские рекомендации по дифференциальной диагностике на основе изображения в градациях серого. Видны контур, поверхность разреза, внутренняя структура, связь с окружающей тканью, инфильтративный, межорганный или подавляющий рост. Признаки воспаления и размер — ключевые параметры.

В печени, насколько это возможно, прослеживаются ходы и ответвления питающих (воротные вены и артерии) и дренирующих (вены печени) сосудов, а также желчного протока.Их природа влияет на эхогенность паренхимы печени точно так же, как паренхиматозные заболевания, наоборот, поражают просветы упомянутых сосудов.

После того, как эти соотношения были разработаны в сонографии основных значений серого, можно использовать управление усилителем сигнала, чтобы усилить или исключить соображения, вытекающие из изображения значений серого. Таким образом, с точки зрения информативности и убедительности CEUS зависит от качества сонографии с серым значением и не является диагностическим средством как таковое.

Печень — единственный орган брюшной полости с двойным кровоснабжением. В то время как воротная вена поставляет критическое количество крови, необходимое для трофического процесса печени, артерии в основном снабжают желчные пути. Микроскопические связи между воротными ветвями и артериями присущи печени и играют роль в сосудистых патологиях и паренхиматозных заболеваниях. Дополнительные сосуды, кровоснабжающие печень транскапсулярно, парапортально или паралигаментарно, могут вызывать различия в эхогенности и временном контрастировании.

Патологические, паренхиматозные или очаговые процессы отклоняются от нормального ожидаемого паттерна кровотока из-за изменения ангиоархитектуры, васкуляризации и, следовательно, перфузии. Опухоли непеченочной ткани и печени демонстрируют измененный паттерн васкуляризации по сравнению с окружающей паренхимой печени.

Скорости, объемы и давление кровотока, перечисленные в таблице 1, применимы к здоровой печени пациента, у которого нет сердечной недостаточности, знание которых важно для оценки явлений патологической васкуляризации (таблица 1).

Таблица 1.

Дуплексные сонографические параметры в сосудах печени и время наводнения в печени после введения периферических вен у здоровых людей [5]

Помимо самого высокого пространственного разрешения изображения, преимущества CEUS заключаются в способности для записи мельчайших сосудов и в динамической записи свойств кровообращения. Чтобы смоделировать условия в режиме реального времени в компьютерной томографии, необходимо запустить несколько коротких спиралей, что значительно увеличивает радиационное воздействие.Пространственное разрешение ультразвука все равно будет лучше.

Многие исследования показали, что КЭУЗ не уступает КТ или магнитно-резонансной томографии (МРТ) по информативности в различных областях применения [2].

Таблицы контрастных явлений в CEUS ограничены в своих утверждениях, потому что они только схематично формулируют характеристики микрососудов и не принимают во внимание изменение кровоснабжения очагового поражения печени в разные периоды его существования.

Как работает CEUS?

Ультразвуковая диагностика — это эхо-импульсный метод, который позволяет визуализировать то, что отражается от ткани обратно к датчику после того, как был подан ультразвуковой импульс. Это важное отличие по сравнению с передачей рентгеновских лучей и МРТ.

Различия в яркости изображения в оттенках серого основаны на различном акустическом импедансе типов тканей; чем больше разница в импедансе, тем сильнее отражение.Кровь (в основном эритроциты) имеет небольшое обратное рассеяние и поэтому является «черной» на изображении со значением серого. Микропузырьки используются для увеличения обратного рассеяния крови.

Контрастные вещества второго поколения состоят из нерастворимого в воде газа, т. Е. Гексафторида серы, окруженного фосфолипидной монослойной мембраной. Девяносто процентов микропузырьков имеют диаметр <5 мкм и, таким образом, допускают множественные легочные проходы, прежде чем они выдохнутся на границе газ-газ в альвеолах легких через 20–30 минут [3].Эти микропузырьки увеличивают обратное рассеяние примерно в 1000 раз из-за скачка импеданса, возникающего на пузырьковой мембране как на границе раздела, и физически их можно рассматривать как эластичный воздушный шар, который вибрирует в зависимости от интенсивности звука.

В начале контрастного ультразвука разрушение пузыря высокой акустической энергией (энергетический допплер) используется, чтобы сделать выводы о сосудистой плотности ткани (рис. 1). Неокрашенные участки представляют ткань с плохой плотностью сосудов [4].

Рис. 1.

Высокий механический индекс (> 1) в режиме энергетического допплера приводит к нарушению микропузырьков, что указывает на сильно васкуляризованную ткань (в настоящее время это известно как режим восполнения или вспышки). Неосвещенные участки обозначают низкую васкуляризацию.

Сегодня низкий механический индекс позволяет умеренным колебаниям пузырьков, чтобы они не лопались слишком быстро и сохранялись в течение длительного времени, что позволяет оценить ангиоархитектуру.

Контрастное ультразвуковое изображение — это изображение выбранных частот; пузырьки, возбуждаемые подходящей частотой (1.7 МГц или целые числа) также колеблются на гармонических частотах (гармониках), потому что сжатие и декомпрессия пузырьков генерируют нелинейные колебания на этих частотах. Эти так называемые гармоники могут быть выборочно представлены ультразвуковым устройством и выделены цветом. В результате получается чисто контрастное изображение (контрастное гармоническое изображение), сравнимое с цифровой субтракционной ангиографией. Напротив, ткань излучает только линейные колебания в этом диапазоне частот. Линейное обратное рассеяние ткани обычно устраняется 2 импульсами на 1 строке изображения с фазовым сдвигом 180 °, компенсирующим линейное обратное рассеяние, в то время как нелинейные сигналы микропузырьков сохраняются — гармоническая визуализация.Одна ампула SonoVue® содержит приблизительно 1 000 000 000 микропузырьков (10 ⁸ или 100 миллионов) после растворения в 4,8 мл изотонического раствора. Микропузырьки можно обнаружить в сосудах диаметром от 0,1 мм.

Представление кровообращения с помощью ультразвукового контрастного вещества основано на вибрационных свойствах микропузырьков. В зависимости от приложенной мощности передачи (акустического давления) микропузырьки вибрируют с увеличением акустического давления с увеличением нелинейности — диаметр пузырька больше не может пропорционально следовать акустическому давлению.Это создает гармоники — гармонические частоты, которые обнаруживаются и обрабатываются для визуализации кровообращения без нарушения отображения тканей.

Очаговые поражения печени

Ангиомы — это мезенхимальные опухоли печени без риска злокачественного образования. Это обычные случайные находки в сонографии, но они также все чаще встречаются при других исследованиях непеченочного среза, таких как МРТ позвоночника и кардио КТ / МРТ. Поскольку эти методы не ориентированы на диагностику очагового поражения печени, часто требуется дальнейшая оценка.CEUS позволяет избежать крупномасштабной диагностики устройств и рентгеновского излучения с помощью компьютерной томографии.

Пять типов ангиоархитектуры можно классифицировать с помощью CEUS [5]. Предпосылкой для диагностики типа изображения всегда является адекватно сохраненная ангиоархитектура. Поскольку сосуды внутри опухоли со временем дегенерируют, гемангиомы имеют широкий спектр проявлений на изображениях с серой шкалой. Их морфология также подвержена изменению эхогенности окружающей паренхимы печени (онлайн-приложение, рис. 1; для всех онлайн-приложений).материалы см. www.karger.com/doi/10.1159/000511352). На изображениях в оттенках серого ангиомы, как правило, невозможно надежно отличить от злокачественных опухолей или метастазов (рис. 2).

Рис. 2.

Слева: метастаз увеальной меланомы похож на ангиому. В центре: большая ангиома и ГЦК не различимы на сером изображении. Справа: ангиома 3-го типа и метастаз аденокарциномы поджелудочной железы неотличимы без CEUS.

Фокальная узловая гиперплазия (ФНГ) — это врожденный порок развития сосудов.Он встречается реже, чем ангиомы, и чаще встречается у женщин. Мультифокальные FNH или сосуществование с гемангиомами не являются чем-то необычным. Знак CEUS — это раннее интраназальное усиление питающей артерии (или артерий). Феномен обкрадывания представляет собой предпочтительную внутриузловую концентрацию микропузырьков за счет концентрации паренхимы в артериальной фазе; это типично для ФНХ. Концентрическое разветвление артерий в типе 1a и эксцентрическое разветвление артерий в типе 1b подразделяются. Классический рубец возникает примерно в 80% случаев.Направление распространения контрастного вещества центробежное и создает узор спиц колеса. FNH имеет артериосистемные свищи, которые перемещают кровь из опухоли в соседние вены. В зависимости от количества сливаемой крови вена может быть расширена. На CEUS микропузырьки появляются в дренирующей вене через несколько секунд после достижения опухоли через питающую артерию (рис. 3).

Рис. 3.

ФНХ типа 1а. Вверху слева: средняя печеночная вена кажется расширенной. Паренхима печени слева от вены неоднородна.Вверху справа: через 13 секунд после введения контрастного вещества расширенная печеночная вена заполнена микропузырьками. В правой печеночной вене и паренхиме пузырьков нет. Слева внизу: питающий сосуд (артерия). Внизу справа: FNH с типичным шрамом.

Гистологически, FNH показывает пролиферацию желчных протоков, в которой можно обнаружить печеночно-специфическое контрастное вещество при МРТ-исследованиях, что позволяет отличить FNH от аденом печени в случае, если CEUS не может быть окончательным.

Злокачественные опухоли печени

Гепатоцеллюлярные карциномы (ГЦК) возникают при циррозе печени и в неразвитой печени и встречаются реже, чем метастазы.Цирроз очаговых поражений подозрителен на ГЦК до выяснения диагноза. Диагностическая ценность CEUS по сравнению с КТ и МРТ широко исследовалась [6]. В цирротической печени развитие диспластического узла до ГЦК является результатом дедифференцировки. Изменяющаяся ангиоархитектура может быть превосходно представлена CEUS. Богатые сосудами узлы с капсульными сосудами и интранодальными вытягивающими опухолевыми артериями различного калибра, ненаправленными ветвями и слепо заканчивающимися опухолевыми артериями являются отличительными чертами CEUS (онлайн-приложение.Рис.2). Снижение перфузии воротной вены является результатом неоангиогенеза и уменьшается по мере его развития. CEUS — это признанный и надежный метод диагностики ГЦК, входящий в состав рекомендаций [7]. CEUS используется для обнаружения жизнеспособных остаточных тканей опухоли после радиочастотной абляции (RFA) из-за его способности визуализировать крошечные кровеносные сосуды.

Холангиокарцинома (CCC) — вторая по распространенности злокачественная опухоль печени с возрастающей распространенностью [8]. Факторы риска включают хроническое воспаление желчных протоков, такое как ПСХ, инфекция ВГС, паразитарные заболевания (эхинококкоз) и пороки развития желчных протоков, такие как болезнь Кароли.Внутрипеченочный периферический CCC — это опухоль, богатая соединительной тканью, дольчатая и часто полициклическая, с более низкой эхогенностью, чем у паренхимы часто жировой ткани печени. Часто наблюдается беспрепятственное прохождение сосудов через опухоль. Поблизости можно найти микроспутники. Может произойти кальцификация опухоли. Капсула печени может быть отведена путем фибротизации (пупкования). Для CEUS характерны выраженные артериопортальные свищи, отталкивающие край карциномы непосредственно в артериальной фазе, и быстрое внутриузловое снижение концентрации микропузырьков (онлайн-приложение.Рис.3).

Сдавление прилегающей холангии приводит к фиброзу желчных путей пораженного сегмента. Как следствие, артериальная перфузия увеличивается из-за плохой перфузии воротной вены в этой области. Таким образом, обнаружение CCC на основе ожидаемой низкой портальной перфузии опухоли в портальной фазе может быть затруднено из-за уменьшения различий в контрасте между опухолью и паренхимой.

Метастазы в печени

Узлы в печени с опухолью в анамнезе или без нее, особенно если предполагается, что они были диагностированы впервые, подозрительны по непеченочному происхождению.Их полутоновое изображение непоследовательно и часто может напоминать доброкачественные узлы печени. Инородная ткань имеет нетриадную, т.е. непарную ангиоархитектуру. По этой причине метастазы в фазе максимального поступления микропузырьков в печень, то есть в портальной фазе, заметны из-за более низкой концентрации пузырьков по сравнению с паренхимой печени (так называемый «феномен вымывания»). Их сосудистое кровоснабжение может изначально сделать метастазы гиперваскуляризованными. Опухоли с типично гиперваскуляризованными филиалами включают злокачественную меланому, рак груди и нейроэндокринные опухоли.Если печень перемежается с узлами, диагностика метастазов в печень проста по «вымытым» узлам с помощью любого метода визуализации. Если речь идет об единичных образованиях с кистозными или некротическими частями или поселениях рядом с доброкачественными узлами, отличить от метастазов труднее (онлайн-приложение, рис. 4). Преимуществами CEUS являются пространственное разрешение, динамика кровотока и дробное болюсное введение контрастного вещества для выборочного отображения узлов.

Абсцессы и внутриполостные CEUS

Диагностика на основе клинических данных, лабораторных анализов и визуализации оказалась разной для каждого из этих критериев, и они не всегда сосуществуют друг с другом.Так же, как есть неопределенности в клинических и лабораторных параметрах, фундаментальная сонография с B-сканированием не всегда ясна, за исключением стадии инкапсулированного абсцесса. Например, абсцессы, вызванные Klebsiella pneumoniae , часто выглядят как солидные опухоли [9]. В зависимости от стадии созревания абсцесса печени с помощью паттерна CEUS можно выделить 4 группы [10]. CEUS предоставляет ценную информацию как для внутривенного, так и для внутриполостного введения в рамках вмешательства [11].Для микробиологического исследования на этапе I сонографист может отличить авитальную некротическую ткань от ишемической ткани с помощью CEUS, поэтому CEUS рекомендуется до получения материала. CEUS может лучше измерять размер абсцесса, отслеживать процесс заживления и значительно увеличивать частоту обнаружения абсцессов меньшего размера по сравнению с фундаментальными изображениями [12] (онлайн-приложение, рис. 5). Внутриполостное УЗИ позволяет получить информацию о правильном положении дренажа и сообщении полости некроза с сосудистыми системами, в печени с желчевыводящими путями (онлайн-приложение.Рис. 6) [13-15] или с венами печени, а также используется для выявления пузырно-уретрального рефлюкса [16]. Как правило, с помощью CEUS можно визуализировать свищи между соседними структурами и анастомотическую недостаточность [17-19].

Поджелудочная железа

Кистозные поражения поджелудочной железы, как и другие образования в брюшной полости, часто являются случайными и редко являются результатом целенаправленного поиска конкретных симптомов. Сонография B-scan применяется при обнаружении новообразования поджелудочной железы и позволяет отличить твердые структуры от кистозных.CEUS предоставляет новаторскую информацию о классификации дифференциальной диагностики и о том, как действовать. В случае кистозных структур узелки, очень тонкие перфузионные перегородки и перфузия стенки могут быть определены лучше, чем при КТ (рис. 4). Различие между муцинозной и серозной неоплазией не хуже, чем при МРТ [20]. Внутрипротоковое папиллярное муцинозное новообразование встречается реже, чем вышеупомянутые кистозные поражения поджелудочной железы. Для диагностики требуется подключение к протоку поджелудочной железы.Ширина прохода 5–9 мм, размер> 3 см и панкреатит с последующей обструкцией являются предупреждающими сигналами, при которых нельзя исключить дегенерацию [21–23].

Рис. 4.

Вверху: кистозное образование на головке поджелудочной железы, распространяющееся на проток Вирсунга. Показаны нодули и перегородки. CEUS показывает узелки и перегородки с контрастным усилением. Внизу: кистозное поражение хвоста поджелудочной железы (вероятно, нежизненное). CEUS показывает тонкие перегородки и узелки, поднимающиеся от стенки кистозного поражения. На резецированной ткани видны внутрипротоковые папиллярные муцинозные новообразования в головке и хвосте поджелудочной железы.

Твердые узлы поджелудочной железы лучше дифференцировать с помощью CEUS. При оценке кровотока в CEUS различают артериальную фазу (10 с), паренхиматозную фазу (10–20 с), венозную фазу (> 60 с) и позднюю фазу (> 120 с). В то время как 90% аденокарцином протоков заметны в результате десмопластической стромы и фиброза из-за более низкой плотности сосудов и, следовательно, менее васкуляризованы по сравнению с окружающей тканью поджелудочной железы (онлайн-приложение, рис. 7), нейроэндокринные опухоли васкуляризированы и гиперваскуляризованы по сравнению с паренхима поджелудочной железы [24, 25].Если B-сканирование и CEUS говорят об аденокарциноме, одновременное выполнение веером печени помогает обнаружить отдаленные метастазы. Соседние лимфатические узлы и отношение к висцеральным ветвям аорты предоставляют информацию о терапевтическом подходе. В паллиативном подходе эти точки измерения служат ориентиром при оценке реакции или прогресса.

Очаговый панкреатит нельзя четко отличить от аденокарциномы на В-сканировании, и, если он правильно локализован, он может вызвать обструкцию желчевыводящих путей, описанную для обоих состояний (внутрипеченочный «признак двойного дробовика»).CEUS может помочь дифференцировать аденокарциному с недостаточной васкуляризацией от очагового воспаления на основе плотности сосудов, при которой контрастное вещество разливается несколько медленнее из-за сопутствующего васкулита и сохраняется значительно дольше, чем при карциноме [26].

Кишечник

Воспалительная активность кишечной стенки описывается методом Доплера при болезни Крона по классификации Лимберга. Количественно определяя усиление контрастного вещества в пораженных слоях стенки, CEUS дает хорошую корреляцию с индексом активности Крона [27].Ответ на терапию также можно оценить по усилению стенок кишечника [28, 29]. Для болезни Крона характерны специфические особенности контрастного ультразвука: притоки, которые снабжают кишечник, прямую вазу, по-видимому, распространяются из корня брыжейки (отметина гребня) из-за фибролипомоподобного воспаления жировой ткани. Знак зоны указывает на усиление васкуляризации слизистой оболочки и суброзной оболочки в пользу менее перфузируемой мышечной ткани [30]. При наличии свищей или абсцессов преимущества внутриполостного УЗИЭ — лучшая визуализация свищей и абсцессов, а также визуальный контроль во время вмешательства.

Другие опухоли желудочно-кишечного тракта

Обычно они обнаруживаются случайно при ультразвуковом исследовании. CEUS может представлять васкуляризацию. Субэпителиальные опухоли, NET и GIST (онлайн-приложение, рис. 8) гиперваскуляризированы, но могут иметь некротические области, особенно в больших опухолях. Если планируется биопсия, CEUS может различать некротические и жизненно важные ткани и снизить риск ошибочной биопсии. Отличить от лейомиомы можно с помощью CEUS [31].

Онкологические проблемы

Помимо прямого вопроса о злокачественных новообразованиях в случае неясных новообразований, последующий мониторинг при лечении опухоли является важным элементом контроля в онкологии.Поведение в ответ и терапевтический эффект для многих объектов оцениваются с помощью визуализации. Протоколы наблюдения за опухолью различаются рекомендациями по визуализации. Стоит задуматься о часто практикуемой рутине ежеквартальных КТ-обследований, часто в сочетании с последующей МРТ печени.

При колоректальной карциноме CEUS была создана для выявления метастазов в печень [32]. В-сканирование при обнаружении небольших метастазов ограничивается рассеянием звуковых волн, особенно в случае жирового образования печени, связанного с терапией.Ответ на терапию, направленную на ангиогенез опухоли с помощью CEUS, можно распознать через короткое время; уменьшение плотности сосудов и метастатическая васкуляризация становятся очевидными при CEUS и коррелируют с выживаемостью без прогрессирования [33–36]. Ультразвук является частью реабилитации при меланоме хориоидеи. В этом контексте нечеткие очаги печени могут быть превосходно прояснены с помощью CEUS и, в случае обнаружения метастазов, подчеркивают показания к ПЭТ-КТ, от которой часто изначально отказывается медицинская страховка (рис.5; онлайн-поставка. Рис. 9–12).

Рис. 5.

Последующее наблюдение после лечения увеальной карциномы. На изображении в градациях серого опухоль печени может быть ошибочно принята за ангиому. CEUS показывает высокий приток микропузырьков в опухоль. Сосудистый рисунок не соответствует предполагаемой ангиоархитектуре. Примерно через 60 с после введения контрастного вещества концентрация пузырьков в опухоли уменьшается. Как видно здесь, метастазы меланомы обычно сильно васкуляризированы. Поражение не было обнаружено на КТ и неправильно интерпретировано на МРТ.

Послеоперационные вопросы

Не существует установленных режимов послеоперационных процедур после вмешательств на брюшной полости из-за множества возможных вопросов. Обычно основное внимание уделяется заживлению ран и клиническому течению. Есть 2 причины, по которым УЗИ является первым выбором для визуализации в послеоперационном периоде; Во-первых, в отличие от радиологии, пользователь визуализации всегда является клиническим исследователем, а во-вторых, УЗИ можно повторять неограниченное количество раз, если результаты требуют контроля или неясны (онлайн-приложение.Рис.13).

Кроме того, в этом контексте также можно проверить, например, в случае неокончательных гистологических данных, была ли достигнута цель вмешательства.

Интраоперационная CEUS

Уже в конце 1980-х годов было доказано, что интраоперационная интракорпоральная, тогда еще чистая высокочастотная ультразвуковая сонография в оттенках серого с осмотром и пальпацией явно превосходила предоперационное использование и КТ с контрастированием. СМИ. Примерно в 20% случаев дополнительные находки в печени привели к изменению хирургической процедуры [резюме в 37].С введением ультразвуковых контрастных агентов, как и в случае контрастной КТ, произошел скачок в качестве, так что CEUS стал методом выбора для проверки паренхиматозных масс. Преимущество интраоперационного интракорпорального В-сканирования УЗИ (ICUS) исчезло, тем более что аппаратное и программное обеспечение для обнаружения пузырей не сравнивали с высокочастотными датчиками, которые можно использовать во время операции. Для ICUS пришлось использовать те же низкочастотные преобразователи, что и для чрескожного звука, только с немного более чувствительным обнаружением.В настоящее время используются частоты преобразователя до 12 МГц и CEUS до 7,5 МГц. Было восстановлено старое отведение, так что результаты могут быть снова получены как минимум в 20% случаев, что приводит к изменению предоперационной запланированной процедуры. Во время операции речь идет прежде всего не о типовой диагностике с помощью CEUS, а о высокочувствительном первом обнаружении опухоли. Одной из основных задач в настоящее время является непосредственный терапевтический контроль термоабляционных процессов с помощью CEUS, независимо от того, был ли достигнут достаточный запас прочности или нужно ли принимать дальнейшие меры (рис.6).

Рис. 6.

Два метастаза прямо в звезду печеночной вены. Интраоперационная CEUS для определения термоабляционной активной зоны в ткани за пределами непосредственной некротизированной зоны: широкие стрелки указывают на испарившийся некроз, в то время как узкие стрелки указывают на разрушенный, не перфузируемый край ткани (т. Е. Достаточный запас безопасности, опыт показал, что это зона, свободная от пустот, расширяется в течение 24 часов).

CEUS при травме

Свободная жидкость — высокочувствительный индикатор соответствующей травмы [38].Причину не всегда можно сразу визуализировать с помощью В-сканографии. CEUS зарекомендовал себя как инструмент для оценки степени повреждения паренхиматозного органа. Однородный контраст регулярного кровотока к тканям или сосудам по сравнению с отказом травматически поврежденных тканей или сосудов представляет собой быстрый диагноз. В некоторых случаях лопнувший сосуд можно непосредственно идентифицировать через выпускное отверстие для микропузырьков.

Обсуждение

Сонография с усилением сигнала и контрастным веществом (CEUS) — проверенный инструмент в широкой области диагностической визуализации.Многочисленные исследования подтвердили преимущества CEUS и подчеркнули его ценность по сравнению с КТ и МРТ. CEUS оставил позицию дополнительной процедуры для неокончательных результатов КТ или МРТ и представляет собой первоклассный диагностический инструмент, за которым могут следовать процедуры радиологической секционной визуализации в смысле стадирования с соответствующими показаниями.

Очаговые поражения печени можно окончательно прояснить с помощью CEUS. CEUS является неотъемлемой частью рекомендаций по диагностике ГЦК. Непонятно, почему КТ по-прежнему считается золотым стандартом контроля после РЧА, хотя преимущества CEUS в обнаружении карциномы также проявляются в контроле после РЧА.

В частности, для небольших поражений CEUS технически превосходит КТ и МРТ по разрешающей способности [39]. Процедура в реальном времени имеет преимущества перед более статичным и перспективно ориентированным исследованием контрастного вещества с помощью КТ или МРТ. Паттерны васкуляризации ГЦК в артериальной, воротной венозной и поздней фазах непоследовательно описаны в различных исследованиях и зависят от степени дедифференцировки опухоли [40]. В критической артериальной фазе перфузии ГЦК не было обнаружено значимой вариабельности между наблюдателями [41].В этом отношении CEUS идеально подходит в качестве метода в реальном времени для обнаружения и уточнения опухолей на основе их индивидуальной ангиоархитектуры. ГЦК размером менее 15 мм труднее обнаружить с помощью МРТ [42]. В принципе, опухолей небольшого размера можно избежать с помощью КТ и, аналогично, с помощью МРТ в результате эффекта частичного объема диагноза. При позднем снижении контрастности, как при некоторых ГЦК G1 и небольших нейроэндокринных филиалах, CEUS превосходит КТ с точки зрения обнаружения.

Как и все методы поперечной визуализации, CEUS не может доказать происхождение метастатических узлов.Точность обнаружения метастазов была многократно доказана, особенно при колоректальном раке. Гиперваскуляризированные метастазы могут возникать из различных опухолей. Метастазы нейроэндокринных опухолей склонны к некрозу, как и некоторые колонизации колоректальной карциномы. Преимущество КТ заключается в лучшем обзоре, благодаря чему обнаружение небольших метастазов, HCC, NET или NEC, особенно в кишечнике, лучше достигается с помощью методов высокого разрешения или методов, связанных с метаболизмом.

Распределение воздуха, звуковые окна и глубина проникновения часто являются препятствиями в сонографии, на которые невозможно повлиять.Часто описываемая врачом зависимость от ультразвука имеет 2 значения. С одной стороны, недостаточные технические знания в области обработки ультразвуком с использованием микропузырьков, а также отсутствие опыта и подготовки в технологии исследования являются ограничивающими факторами, которые применимы не только к ультразвуку. С другой стороны, этот метод может дать отличные и поразительно убедительные изображения патологических процессов в натренированной и натренированной руке. Технические факторы существуют как для радиологических, так и для сонографических методов. Ультразвуковые аппараты имеют программное обеспечение для конкретных устройств и не идентичны в обращении с CEUS.В зависимости от ультразвукового аппарата качество воспроизведения изображения может быть изменено с помощью множества настроек и требует хороших навыков настройки. При КТ концентрация йода, размер и поток болюса, а также время получения изображения с фиксированными задержками или фазами концентрации контрастного вещества, инициируемыми ROI, сами по себе не должны выбираться единовременно для каждого пациента и, следовательно, являются параметрами. влияющие на качество экспертизы.

Необходимое пространство поджелудочной железы обычно первоначально определяется с помощью полутонового ультразвукового исследования.Не всегда можно отличить кистозные образования от солидных. Чем меньше узел, тем труднее его различить. Узлы размером менее 20 мм могут ускользнуть от КТ или не могут быть классифицированы с достаточной точностью [43].

CEUS надежно дифференцирует твердые модули от кистозных и показывает перегородки и узелки кистозных опухолей так же четко, как и МРТ. В дифференцировке кистозной неоплазии CEUS превосходит КТ и эквивалентен МРТ [44]. Наиболее распространенным солидным образованием поджелудочной железы является протоковая аденокарцинома, которая распознается с высокой точностью и может очень хорошо отличаться от нейроэндокринной неоплазии как второй по распространенности солидной неоплазии поджелудочной железы.

Дифференциально-диагностические трудности возникают при трансабдоминальном CEUS при небольшой микрокистозной серозной неоплазии, которая из-за микрокистозной структуры может имитировать гиперваскуляризованную опухоль. Эндосонографическое представление как ECEUS может растворять ангиоархитектуру и, следовательно, полезно для определения границ твердых гиперваскуляризованных узлов [25].

Хотя ультразвуковое исследование не является методом выбора для локализации опухолей желудочно-кишечного тракта, ультразвук может сделать ценную работу. При поиске первичных метастазов в печени, подозрительных на НЭО, УЗИ тонкой кишки часто выявляет первичные очаги в тощей кишке.Гиперваскуляризированные опухоли могут быть отнесены к общим субэпителиальным опухолям NET или GIST. Указание на их местонахождение служит важным показателем для последующего постановочного обследования. Если необходимо провести биопсию кишечной опухоли как часть гистологической резервной копии, CEUS может определить области некроза и повысить вероятность успешного отбора проб.

Заключение

С CEUS в качестве дополнения с низким уровнем осложнений к превосходной сонографии с серым значением, клиницисту предоставляется ценная диагностическая процедура по широкому спектру показаний, которая предоставляет немедленную информацию для завершения диагноза или для начала дальнейшей диагностики или шаги терапии.Наряду с радиологической секционной визуализацией он заменил свое доминирование во многих областях. Отсутствие обзора и физические ограничения обычно ограничивают использование ультразвука как единственного средства исследования. Когда необходимо продемонстрировать патологические процессы с точки зрения морфологии изображения, УЗИ является первым диагностическим инструментом и, в сочетании с CEUS, первоклассной процедурой.

Заявление об этике

Поскольку это обзорная статья, одобрение учреждения и согласие пациента не требовались.

Заявление о конфликте интересов

S.B. не имеет конфликта интересов, о котором следует сообщать. J.H.S. заявляет, что получил гонорары за лекции от Mylan Healthcare GmbH.

Источники финансирования

Авторы не получали финансирования для этой статьи.

Вклад авторов

S.B. написал эту статью. J.H.S. критически переработал эту работу и добавил параграф об интраоперационной сонографии и CEUS при травмах.

Список литературы

Weskott HP.Ультразвук с контрастным усилением. 2-е изд. Лондон: Uni-Med Science; 2013. с. 240.
Зейтц К., Штробель Д., Бернатик Т., Бланк В., Фридрих-Руст М., Хербей А. и др. Ультразвук с контрастным усилением (CEUS) для характеристики очаговых поражений печени — проспективное сравнение в клинической практике: CEUS vs.КТ (многоцентровое исследование DEGUM). Части этой рукописи были представлены на Ultrasound Dreiländertreffen 2008, Давос. Ultraschall Med. 2009 август; 30 (4): 383–9.
Greis C. Erratum zu: Technische Grundlagen der Kontrastsonographie im Überblick und Ausblick in die Zukunft. Радиолог.2011; 51 (8): 679.
Вермке В., Гассманн Б. Узлы рубцовой ткани при закрытой травме печени. Опухолевая диагностика печени с помощью эхосигналов. Берлин, Гейдельберг: Спрингер; 1998 г.
Вермке В.Sonographische Differenzialdiagnose, Leberkrankheiten, Lehrbuch und systematischer Atlas. Deutscher Ärzte-Verlag Köln; 2005 г.
Зейтц К., Грейс С., Шулер А., Бернатик Т., Бланк В., Дитрих К.Ф. и др. Частота опухолевых образований среди опухолей печени неясной этиологии, первоначально обнаруженных с помощью сонографии в нецирротической или цирротической печени у 1349 пациентов.Результаты многоцентрового исследования DEGUM. Ultraschall Med. 2011 декабрь; 32 (6): 598–603.
Дитрих К.Ф., Поттхофф А., Хельмбергер Т., Игни А., Уиллманн Дж. К.; Рабочая группа CEUS LI-RADS. Standardisierte Befundung und Dokumentation der Kontrastmittelsonografie der Leber (CEUS LI-RADS). З. Гастроэнтерол.2018 Май; 56 (5): 499–506.
Кирштейн М.М., Фогель А. Эпидемиология и факторы риска холангиокарциномы. Visc Med. 2016 декабрь; 32 (6): 395–400.
Hui JY, Yang MK, Cho DH, Li A, Loke TK, Chan JC и др.Пиогенные абсцессы печени, вызванные Klebsiella pneumoniae: внешний вид и результаты аспирации в США. Радиология. 2007 Март; 242 (3): 769–76.
Кунце Г., Стариц М., Кёлер М. Ультразвук с контрастным усилением на разных стадиях гнойного абсцесса печени. Ультразвук Med Biol. 2015 Апрель; 41 (4): 952–9.
Игни А., Дженссен С., Цуй XW, Шуесслер Г., Дитрих К.Ф. Внутриполостное ультразвуковое исследование с контрастным усилением при дренировании абсцесса — возможность и клиническая ценность. Сканд Дж Гастроэнтерол. 2016, январь; 51 (1): 41–7.
Франсика Дж.Внутриполостное ультразвуковое исследование с контрастным усилением при чрескожном ведении скоплений / абсцессов брюшной жидкости под ультразвуковым контролем одним врачом: пример ультразвукового исследования в месте оказания медицинской помощи. J Ультразвук. 2020 июн; 23 (2): 175–81.
Хуанг Д.Ю., Юсуф Г.Т., Данеши М., Рамнарин Р., Деганелло А., Селларс М.Э. и др.Ультразвук с контрастным усилением (CEUS) при абдоминальном вмешательстве. Abdom Radiol (Нью-Йорк). 2018 апр; 43 (4): 960–76.
Попеску А., Спорея И., Ширли Р., Данила М., Маре Р., Грэдинару Ташкау О. и др. Улучшает ли контрастное усиленное УЗИ лечение абсцессов печени? Единый центр.Med Ultrason. 2015 декабрь; 17 (4): 451–5.
Luyao Z, Xiaoyan X, Huixiong X, Zuo-Feng X, Guang-Jian L, Ming-de L. Чрескожная холангиография под контролем УЗИ с использованием микропузырьков для оценки расширенных желчных путей: первоначальный опыт. Eur Radiol. 2012 февраль; 22 (2): 371–8.
Дардж К.Урозонография мочеиспускания с ультразвуковыми контрастными веществами для диагностики пузырно-мочеточникового рефлюкса у детей. I. Порядок действий. Pediatr Radiol. Январь 2008 г., 38 (1): 40–53.
Хайнцманн А., Мюллер Т., Лейтляйн Дж., Браун Б., Кубица С., Бланк В. Ультразвук с внутриполостным контрастированием (CEUS) — работа продолжается.Ultraschall Med. 2012 февраль; 33 (1): 76–84.
Игни А., Аткинсон Н.С., Шуесслер Г., Дитрих К.Ф. Контрастные вещества для ультразвука. Эндоскопическое УЗИ. Ноябрь-декабрь 2016 г .; 5 (6): 355–62.
Сидху П.С., Кантисани В., Дитрих К.Ф., Гилья О.Н., Сафтойу А., Бартельс Е. и др.Руководство и рекомендации EFSUMB по клинической практике ультразвукового исследования с контрастным усилением (CEUS) при применении вне печени: обновление 2017 г. (полная версия). Ultraschall Med. 2018 Апрель; 39 (2): e2–44.
Sun Y, Yang S, Qi E, Liu F, Zhou F, Lu Y и др. Сравнительная диагностическая оценка с использованием контрастного ультразвука, компьютерной томографии и магнитно-резонансной томографии у пациентов с кистозными новообразованиями поджелудочной железы.Cancer Manag Res. 2020 апр; 12: 2889–98.
Хакерт Т., Фриц С., Клаусс М., Бергманн Ф., Хинц Ю., Штробель О. и др. Внутрипротоковое папиллярное слизистое новообразование: высокий риск рака при диаметре протока от 5 до 9 мм. Ann Surg. 2015 ноя; 262 (5): 875–80.
Танака М.Тридцатилетний опыт работы с внутрипротоковым папиллярным муцинозным новообразованием поджелудочной железы: от открытия до международного консенсуса. Пищеварение. 2014; 90 (4): 265–72.
Ананд Н., Сампат К., Ву БЮ. Особенности кист и риск злокачественных новообразований при внутрипротоковых папиллярных муцинозных новообразованиях поджелудочной железы: метаанализ.Clin Gastroenterol Hepatol. 2013 август; 11 (8): 913–21.
Dörffel Y, Wermke W. Нейроэндокринные опухоли: характеристика с помощью ультразвукового исследования с контрастным усилением. Ultraschall Med. Октябрь 2008 г., 29 (5): 506–14.
Дитрих К.Ф., Йенсен К.Современная ультразвуковая визуализация опухолей поджелудочной железы. Ультразвуковое исследование. 2020 Апрель; 39 (2): 105–13.
Виталий Ф., Пфейфер Л., Янсон С., Гертц Р.С., Нейрат М.Ф., Штробель Д. и др. Количественный анализ перфузии с помощью УЗИ с контрастным усилением поджелудочной железы (DCE-US): многообещающий инструмент для дифференциации аутоиммунного панкреатита и рака поджелудочной железы.З. Гастроэнтерол. 2015 Октябрь; 53 (10): 1175–81.
Kunze G, Seitz K, Mauch M, Petersen F. Клиническое ультразвуковое исследование при воспалительном заболевании кишечника. Ultraschall Med. 2019 Апрель; 40 (2): 132–62.
Моччи Г., Мигаледду В., Кабрас Ф., Сиригу Д., Скану Д., Вирджилио Г. и др.Визуализация SICUS и CEUS при болезни Крона: обновленная информация. J Ультразвук. 2017 Янв; 20 (1): 1–9.
Кинкель Х., Михельс Г., Ясперс Н. Ультразвук в диагностике и последующем наблюдении хронических воспалительных заболеваний кишечника.Dtsch Med Wochenschr. 2015, январь; 140 (1): 46–50.
Вайс Д., Ван дер Вег Б., Френцер А. Проспективное исследование ультразвука с контрастным усилением (CEUS) у пациентов с болезнью Крона. Jahreskongress Schweizerische Gesellschaft für Gastroenterologie; 2011 г.
Ignee A, Jenssen C, Hocke M, Dong Y, Wang WP, Cui XW и др.Контрастная (эндоскопическая) ультразвуковая и эндоскопическая ультразвуковая эластография при опухолях стромы желудочно-кишечного тракта. Эндоскопическое УЗИ. 2017, январь-февраль; 6 (1): 55–60.
Бернатик Т., Шулер А., Кунце Г., Маух М., Дитрих К.Ф., Диркс К. и др. Преимущество контрастно-усиленного ультразвука (CEUS) при последующем наблюдении за пациентами с раком толстой кишки: проспективное многоцентровое исследование.Ultraschall Med. 2015 декабрь; 36 (6): 590–3.
Paprottka PM, Roßpunt S, Ingrisch M, Cyran CC, Nikolaou K, Reiser MF и др. Уменьшение роста опухоли и ангиогенеза с помощью тройной терапии, измеряемой ультразвуком с контрастным усилением (CEUS). BMC Рак. 2015 Май; 15 (1): 373.
Wu Z, Yang X, Chen L, Wang Z, Shi Y, Mao H и др.Антиангиогенная терапия с контрастным усилением ультразвука у пациентов с колоректальным раком с метастазами в печень. Медицина (Балтимор). 2017 Май; 96 (20): e6731.
Амадори М., Бароне Д., Скарпи Е., Обольди Д., Амадори Е., Банди Г. и др. Динамическое ультразвуковое исследование с контрастным усилением (D-CEUS) для раннего прогнозирования эффективности бевацизумаба у пациентов с метастатическим колоректальным раком.Eur Radiol. 2018 июл; 28 (7): 2969–78.
Зокко М.А., Гаркович М., Лупашку А., Ди Стазио Э., Роккарина Д., Анниккиарико Б.Э. и др. Раннее прогнозирование ответа на сорафениб у пациентов с запущенной гепатоцеллюлярной карциномой: роль ультразвука с динамическим контрастированием. J Hepatol.2013 ноябрь; 59 (5): 1014–21.
Ultraschall in der Chirurgie. Симановски JH, Мендель V, редакторы. Интраоперационная и интервенционная сонография. Springer-Verlag GmbH; 1991. С. 205.
Simanowski JH.Тупая травма и острые заболевания живота и грудной клетки: свободная жидкость — что теперь? Ultraschall Med. 2019 Октябрь; 40 (5): 552–9.
Сяо Ц.Ю., Чен П.Д., Хуан К.В. Проспективная оценка диагностической ценности контрастного ультразвука, динамической компьютерной томографии и магнитно-резонансной томографии для пациентов с небольшими опухолями печени.J Clin Med. 2019 Сен; 8 (9): 1353.
Ян Д., Ли Р., Чжан XH, Тан К.Л., Ма К.С., Го Д.Й. и др. Характеристики перфузии гепатоцеллюлярной карциномы при контрастном ультразвуковом исследовании: влияние клеточной дифференцировки, размера опухоли и основного состояния печени.Научный доклад Март 2018; 8 (1): 4713.
Schellhaas B, Pfeifer L, Kielisch C, Goertz RS, Neurath MF, Strobel D. Соглашение между наблюдателями о стандартизированных алгоритмах на основе контрастного ультразвука (CEUS) для диагностики гепатоцеллюлярной карциномы у пациентов с высоким риском. Ultraschall Med.2018 декабрь; 39 (6): 667–74.
Schwarze V, Marschner C, Völckers W., Grosu S, Negrão de Figueiredo G, Rübenthaler J, et al. Диагностическая ценность УЗИ с контрастным усилением по сравнению с компьютерной томографией при гепатоцеллюлярной карциноме: ретроспективная одноцентровая оценка 234 пациентов.J Int Med Res. 2020 июн; 48 (6): 300060520930151.
Dietrich CF, Burmester E. УЗИ с контрастным усилением небольших очаговых солидных поражений поджелудочной железы: обязательно! Эндоскопическое УЗИ. 2017 декабрь; 6 (9 приложение 3): S106–10.
Fan Z, Yan K, Wang Y, Qiu J, Wu W, Yang L и др.Применение контрастного ультразвука при кистозных поражениях поджелудочной железы с использованием упрощенного диагностического критерия классификации. BioMed Res Int. 2015; 2015: 974621.

Автор Контакты

Jörg H. Simanowski

Клиника общей, висцеральной, сосудистой хирургии и хирургии ожирения и междисциплинарный центр неотложной помощи клиники Nordstadt Ганноверского региона Клиника

Haltenhoffstrasse 41, DE – 30167 Hannover (Германия)

[email protected]

Подробности статьи / публикации

Предварительный просмотр первой страницы

Поступила: 25 июля 2020 г.
Дата принятия: 3 сентября 2020 г.
Опубликована онлайн: 26 ноября 2020 г.
Дата выпуска: декабрь 2020

Количество страниц для печати: 11
Количество фигур: 6
Количество столов: 1

ISSN: 2297-4725 (печатный)
eISSN: 2297-475X (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/VIS

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме или любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование, или с помощью какой-либо системы хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарств: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарств, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новое и / или редко применяемое лекарство.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности. Издатель и редактор (-ы) не несут ответственности за любой ущерб, причиненный людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в контенте или рекламе.

Достижения в области контрастных агентов для контрастной магнитно-резонансной томографии

Вступление: Магнитно-резонансная томография (МРТ) — это хорошо зарекомендовавшее себя медицинское изобретение в современной диагностике медицинских технологий.Это неразрушающий, универсальный и чувствительный метод с высоким пространственным разрешением для медицинской диагностики. Однако МРТ имеет некоторые ограничения в дифференциации определенных тканей, особенно крошечных кровеносных сосудов, патологий здоровых тканей, определенных опухолей и воспалительных состояний, таких как артрит, атеросклероз и рассеянный склероз. Визуализация с использованием контрастного вещества (КА) — лучшее возможное решение для устранения ограничений МРТ.

Метод: Обзор литературы проводился с использованием ключевых слов: «МРТ, T1 и T2 релаксация, МРТ CA, доставка и побочные эффекты, классификация CA».»Для поиска литературы использовались инструменты PubMed, Scopus и Google Scholar.

Результат и обсуждение: Литературные данные сосредоточены на технике МРТ, ограничениях и возможных решениях. В первую очередь обзор посвящен механизму КА в формировании изображения с подробным объяснением релаксации Т1 и Т2, механизма формирования изображения МРТ-КА. В этом обзоре представлены побочные эффекты CA, а также доступные на рынке составы и недавние патенты, чтобы получить полную информацию о MRI-CA.

Заключение: МРТ генерирует подробную визуальную информацию о различных тканях с высоким разрешением и контрастом. Протон, присутствующий в биологической жидкости, играет решающую роль в формировании МР-изображения, и во многих случаях он не может отличить патологические состояния. СА — лучшее решение для устранения ограничения за счет взаимодействия с собственными протонами. В настоящем обзоре обсуждается механизм КА при усилении контраста и его широкая классификация с учетом последних литературных данных.Кроме того, в статье представлена информация о биораспределении КА и побочных эффектах. Обзор завершается подходящим решением для побочных эффектов и представляет будущие перспективы для исследователей в разработке передовых рецептур.

Ключевые слова: МРТ; Контрастные вещества для МРТ; T1 и T2 релаксация; классификация контрастных веществ; доставка и побочные эффекты.

Ингибирование инфламмасомы NLRP3 ослабляет апоптоз при остром поражении почек, вызванном контрастированием, за счет активации HIF1A и BNIP3-опосредованной митофагии

Патогенетический механизм острого повреждения почек, вызванного контрастированием (CI-AKI), которое является третьей по частоте причиной внутрибольничной ОПН, не выяснен.Ранее мы продемонстрировали, что повреждение почек и апоптоз клеток были ослаблены у мышей CI-AKI с нокаутом nlrp3 . Здесь мы исследовали механизм, лежащий в основе опосредованного ингибированием NLRP3 ослабления апоптоза при CI-AKI. Анализ секвенирования РНК коры почек показал, что мыши CI-AKI с нокаутом nlrp3 или casp1 демонстрируют усиленный клеточный ответ на гипоксию, митохондриальное окисление и аутофагию по сравнению с мышами CI-AKI дикого типа (WT), которые показали, что ингибирование инфламмасомы NLRP3 приводит к усилению регуляции сигнального пути гипоксии и митофагии.У мышей CI-AKI с нокаутом nlrp3 или casp1 и обработанных йогексолом клеток HK-2 с предварительной обработкой MCC950 наблюдались повышенные уровни HIF1A, BECN1, BNIP3 и LC3B-II, а также усиленная совместная локализация LC3B и митохондрий с BNB. и совместная локализация митохондрий с лизосомами. Кроме того, роксадустат, ингибитор пролилгидроксилазы HIF, защищал эпителиальные клетки почечных канальцев от вызванного йогексолом повреждения за счет стабилизации HIF1A и активации нижестоящей BNIP3-опосредованной митофагии in vivo и in vitro .Более того, дефицит BNIP3 заметно снижает митофагию, а также значительно усугубляет апоптоз и повреждение почек. Это свидетельствует о защитной функции BNIP3-опосредованной митофагии при CI-AKI. Это исследование выявило новый механизм, в котором ингибирование инфламмасом NLRP3 ослабляет апоптоз и усиливает HIF1A и BNIP3-опосредованную митофагию при CI-AKI. Кроме того, это исследование продемонстрировало потенциальное применение MCC950 и роксадустата в клиническом лечении CI-AKI. Сокращения: BNIP3: BCL2 / аденовирус E1B, взаимодействующий белок 3; Ctrl: управление; DAPI: 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндол дигидрохлорид; EGLN2 / PHD1: фактор 2, индуцируемый гипоксией семейства egl-9; HIF1A: фактор, индуцируемый гипоксией 1, альфа-субъединица; H-E: гематоксилин и эозин; IL18: интерлейкин 18; IL1B: интерлейкин 1 бета; LAMP1: ассоциированный с лизосомами мембранный белок 1; MAP1LC3B / LC3B: ассоциированный с микротрубочками белок 1 легкая цепь 3 бета; мРНК: информационная РНК; NFKB / NF-κB: ядерный фактор энхансера гена легкого каппа-полипептида в В-клетках; NLRP3: семейство NLR, пириновый домен, содержащий 3; NS: физиологический раствор; PRKN / Parkin: убиквитин-протеинлигаза parkin RBR E3; PINK1: предполагаемая киназа 1, индуцированная PTEN; РНК: рибонуклеиновая кислота; SEM: стандартная ошибка среднего; миРНК: малая интерферирующая РНК; ТЕМ: просвечивающая электронная микроскопия; ТУБА / α-тубулин: тубулин, альфа; TUNEL: мечение ник-конца dUTP, опосредованное терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой; VDAC: анионный канал, зависящий от напряжения; WT: дикий тип.

Ключевые слова: Острое повреждение почек; NLRP3 инфламмасома; контрастные вещества; фактор, индуцируемый гипоксией; митофагия.

Frontiers | AtOMA1 влияет на систему OXPHOS и рост растений в отличие от других недавно идентифицированных АТФ-независимых протеаз в митохондриях Arabidopsis

Введение

Для правильного функционирования митохондрий требуется эффективная система для поддержания количества и качества митохондриального протеома.Помимо шаперонов, ключевыми игроками в этой системе являются митопротеазы, которые можно разделить на две группы в зависимости от требований АТФ для их активности. АТФ-зависимые протеазы участвуют в деградации неправильно свернутых или поврежденных белков. Будучи процессирующими пептидазами, они также необходимы для нативного регуляторного обмена белков (Janska et al., 2010; Quirós et al., 2015; van Wijk, 2015). С другой стороны, АТФ-независимые протеазы в значительной степени участвуют в ограниченном протеолитическом расщеплении предпоследовательностей и созревании белка.Однако этот тип протеаз также может расщеплять белки, например, протеазы Deg (деградация периплазматических белков), также известные как протеазы HtrA (требования к высокой температуре A), которые отсутствуют в дрожжах (Tanz et al., 2014), или олигопептидазы. которые расщепляют короткие полипептиды до аминокислот АТФ-независимым образом (Käser and Langer, 2000).

Удаление N-концевого фрагмента белка до того, как он достигнет своего конечного пункта назначения, из-за активности специфических процессинговых пептидаз характерно для большинства митохондриальных белков, и наиболее изученным ферментом, обладающим такой активностью, является процессирующая митохондрия пептидаза ( MPP) (Teixeira and Glaser, 2013).Расщепление митохондриальных предшественников с помощью MPP может сопровождаться дополнительным обрезанием. В митохондриальном матриксе дрожжей образующиеся MPP белковые промежуточные соединения последовательно расщепляются митохондриальной промежуточной пептидазой (MIP) (Kalousek et al., 1988; Isaya et al., 1991) или промежуточной расщепляющей пептидазой (Icp55; молекулярная масса 55). кДа) (Vögtle et al., 2009), что приводит к образованию зрелых белков. В дрожжах MIP удаляет остатки октапептида, расположенные после сайта расщепления MPP, и поэтому MIP также обозначается как октапептидиламинопептидаза 1 (Oct1) (Gakh et al., 2002). Дрожжи Icp55 удаляют один аминокислотный остаток из промежуточных продуктов, образованных MPP. В соответствии с правилом N-конца, промежуточный белок, который действует как субстрат для этих двух протеаз, несет дестабилизирующие аминокислоты на N-конце, и вторая стадия процессинга превращает этот нестабильный предшественник в стабильный зрелый белок (Mossmann et al. , 2012). Недавно гомологи дрожжевого Oct1 (AtOCT1) и Icp55 (AtICP55) были идентифицированы в митохондриях растений (Carrie et al., 2015; Huang et al., 2015). Хотя для AtICP55 были обнаружены два типа субстратов с характерными мотивами расщепления, один подобный наблюдаемому у дрожжей, а второй — специфичный для растений, субстраты AtOCT1 из Arabidopsis не имели консенсусного мотива расщепления и не обладали классическим мотивом -10R, что характерно. других эукариот (Carrie et al., 2015; Huang et al., 2015). Вторая стадия процессинга в дрожжах также может осуществляться с помощью комплекса пептидазы внутренней мембраны (IMP), состоящего из двух каталитических субъединиц Imp1 и Imp2 и некаталитической субъединицы Som1, а также ромбовидной протеазы Pcp1 (процессинг цитохрома c пероксидаза).IMP отщепляет сигналы гидрофобной сортировки от белков, которые ранее были обработаны MPP и отсортированы в межмембранное пространство (IMS). Ромбовидный дрожжевой Pcp1 выполняет второе расщепление в трансмембранной области своих субстратов, высвобождая, таким образом, зрелые белки в IMS. В митохондриях растений экспериментально идентифицирован только один ортолог Pcp1 (ромбовидный белок-AtRBL12), но его субстраты и механизм действия остаются неизвестными (Kmiec-Wisniewska et al., 2008). Более того, необычный двухэтапный процессинг, в котором обе стадии выполняются с помощью MPP, был зарегистрирован у дрожжей (Branda et al., 1999) и растений (Kmiec et al., 2012).

В митохондриях дрожжей было показано, что помимо классических пептидаз препоследовательности (MPP, IMP и Oct1), несколько других протеаз проявляют активность процессинга предшественников. Одним из них является Atp23, металлопептидаза, расположенная в IMS, которая опосредует расщепление предследовательности митохондриально кодируемого Atp6 после его встраивания во внутреннюю мембрану (Osman et al., 2007; Zeng et al., 2007). Независимо от своей процессорной активности, Atp23 также выполняет функцию шаперона, способствуя сборке Atp6 в комплекс F0 АТФазы F1F0 (Osman et al., 2007). Более того, было задокументировано, что Atp23 участвует в обороте IMS белка Ups1, который регулирует правильное распределение фосфолипидов во внутренней мембране (Potting et al., 2010).

Oma1 (перекрывающаяся активность с протеазой m -AAA) была впервые обнаружена у дрожжей как АТФ-независимая металлопротеиназа цинка, которая была способна расщеплять неправильно свернутые мембранные белки в отсутствие протеазы m -AAA (Käser et al. ., 2003). У млекопитающих OMA1 участвует в процессинге OPA1, динамин-подобной GTPase, необходимой для слияния внутренней митохондриальной мембраны (Baker et al., 2014). Недавно было показано, что дрожжи Oma1 проявляют сильно повышенную активность в ответ на различные стрессы (Anand et al., 2013; Bohovych et al., 2014; Rainbolt et al., 2015; Richter et al., 2015). Кроме того, исследования на дрожжах и многоклеточных животных показали, что Oma1 необходим для стабилизации суперкомплексов дыхательной цепи (RSC) (Bohovych et al., 2015). Кроме того, было показано, что Oma1 участвует в регуляции передачи сигналов TOR (мишень рапамицина) у дрожжей (Bohovych et al., 2016).

В течение многих лет информация об АТФ-независимой протеолитической системе в митохондриях растений ограничивалась характеристикой MPP. Недавние исследования олигопептидаз (Kmiec et al., 2014), протеаз ICP55 и OCT1 (Carrie et al., 2015; Huang et al., 2015) начали заполнять этот пробел в знаниях. Целью нашего исследования было выявить сходство между АТФ-независимыми протеолитическими системами у растений и дрожжей, а также установить особенности этой системы у растений.Здесь мы идентифицировали новые гомологи Arabidopsis митохондриальных АТФ-независимых протеаз дрожжей: Imp1, Imp2, Atp23 и Oma1. Мы проанализировали их вместе с ранее известными АТФ-независимыми митохондриальными протеазами растений, AtICP55 и AtOCT1, в отношении их способности к функциональной комплементации у дрожжей и их влияния на рост и развитие Arabidopsis. Мы продемонстрировали, что из всех исследованных протеаз только AtICP55 и AtOMA1 способны спасти дрожжевой мутантный фенотип, лишенный соответствующей протеазы, и что отсутствие единственной АТФ-независимой протеазы не влияет на рост и развитие Arabidopsis, за исключением AtOMA1.Чтобы получить более полное представление о возможных митохондриальных функциях исследуемых протеаз, была исследована функциональность OXPHOS в соответствующих нулевых мутантах. Результаты свидетельствуют о значительной роли AtOMA1 в системе OXPHOS, особенно в комплексе V, в отличие от других АТФ-независимых протеаз Arabidopsis, исследованных в этом исследовании.

Материалы и методы

Растительный материал

Arabidopsis thaliana растения (экотип Columbia, Col-0) выращивали в почве при 22 ° C, влажности 70% и 150 мкмоль / м ^-2 ⋅s ^-1 свет при 16-часовом освещении / 8-часовой темный фотопериод (длинный день, LD) или в камерах для выращивания под фотопериодом LD при 22 ° C или 30 ° C (водные культуры или чашки с агаром).Для выращивания в водных культурах прибл. 200 стерилизованных семян добавляли к 80 мл питательной среды (1/2 среды Мурашиге и Скуга (MS), 3% сахарозы, 2 мМ MES, 1,5 г / л витаминов Gamborg B5 (1000 ×), pH 5,7) и инкубировали в орбитальный шейкер при 80–100 об / мин в течение 2 недель. Для роста на чашки с агаром стерильные семена высевали на 1/2 MS с 1,5% сахарозы и 1% бактоагара с добавлением 300 мМ маннита или 0,5 мкМ параквата. Были получены мутантные семена с инсерцией Т-ДНК (SALK_093517C, SALK_094274, SALK_077448, SALK_012114C, SALK_088054C, SAIL_135_G10, WiscDsLox507A03, GABI_893A04, SAL272K02, SAL27K02A04, SAL27K02A02, SAL27K02_0802, SAL27K02_0802).Гомозиготные мутанты отбирали с помощью ПЦР на матрице геномной ДНК с использованием праймеров, описанных в дополнительной таблице S2. Положение вставки Т-ДНК в гомозиготных нокаутных растениях A. thaliana подтверждали секвенированием. Отсутствие экспрессии генов в отобранных гомозиготных растениях определяли с помощью ОТ-ПЦР с использованием праймеров, перечисленных в дополнительной таблице S2. Амплификацию транскрипта ACT2 гена (At3g18780) использовали в качестве контроля. Прогрессию роста анализировали согласно Boyes et al.(2001).

Конструирование плазмиды для экспрессии в дрожжах, протопластах и растениях

Для клонирования протеаз растений или дрожжей полноразмерные кодирующие последовательности были амплифицированы с помощью Phusion Polymerase (Thermo Scientific) с праймерами, перечисленными в дополнительной таблице S2, с использованием в качестве матрицы кДНК, синтезированной из общей РНК растений дикого типа или геномной ДНК. из дрожжевых клеток дикого типа, соответственно. Продукты ПЦР клонировали в вектор шлюза pENTR-D-TOPO (Thermo Scientific) для создания исходных клонов.Для временной экспрессии в протопластах исходные клоны рекомбинировали в p2GWF7 (Joubès et al., 2004) с получением C-концевых GFP-меченных пептидаз. Для стабильной экспрессии C-концевых GFP-меченых пептидаз исходные клоны рекомбинировали в pGWB551 (Nakagawa et al., 2007). Для стабильной экспрессии меченного FLAG AtOMA1 клон входа рекомбинировали в pGWB511 (Nakagawa et al., 2007). Для стабильной экспрессии AtATP23 с меткой FLAG, последовательность, кодирующая тройную метку FLAG, была добавлена к 5′-концу кодирующей последовательности AtATP23 с помощью ПЦР.Продукт гибридной ПЦР клонировали в вектор Gateway pENTR-D-TOPO (Thermo Scientific), и полученный клон рекомбинировали в pGWB514 (Nakagawa et al., 2007). Для анализа комплементации дрожжей исходные клоны рекомбинировали в pVV209 (Van Mullem et al., 2003) с получением C-концевых HA-меченных пептидаз. Все конструкции были проверены секвенированием ДНК и перечислены в дополнительной таблице S4.

Выделение, трансфекция и конфокальная визуализация протопластов

Выделение протопластов и трансфекцию проводили согласно Yoo et al.(2007). Фотографии протопластов получали с помощью сканирующего конфокального микроскопа (Olympus и Zeiss), оснащенного объективом 40X NA = 0,95, с использованием длины волны возбуждения 488 нм для GFP и 561 нм для MitoTracker CMXRos (Life Technologies). Изображения протопластов обрабатывали и анализировали с помощью программы ImageJ.

Трансформация растений

Трансгенные растения Arabidopsis atp23flag ^OE, oct1flag ^OE, oma1flag ^OE и imp1agfp ^OE растения были получены с помощью вакуумной инфильтрации (штамм Clough и Bent460fBa L 1.Отбор трансформантов проводили на среде 1/2 MS с добавлением 1,5% сахарозы и 30 мкг / мл гигромицина.

Штаммы дрожжей, анализ трансформации и комплементации

Дрожжевые штаммы imp1Δ ( IMP1 :: kanMX4 ), imp2Δ ( IMP2 :: kanMX4 ), oct1Δ (oct1 :: kanMX4 ), 55 :: ^{ICP (icp)} ICP () , и oma1Δ (OMA1 :: kanMX4) были изогенными BY4742 и были получены от Euroscarf.Штамм CW3 ( atp23 Δ :: HIS3MX6 ), изогенный W303-1B, любезно предоставлен проф. Томас Лангер (Кельнский университет). Штамм coa2Δ был получен методом замены гена на основе ПЦР с использованием кассеты natMX4 , амплифицированной из плазмиды pAG25 (Goldstein and McCusker, 1999). Нарушение гена COA2 в oma1Δ было произведено с использованием кассеты HIS3MX6 , амплифицированной из плазмиды pFA6a-His3MX6 (Longtine et al., 1998). Праймеры для ПЦР, используемые для амплификации кассеты и проверки разрушения, перечислены в дополнительной таблице S3. Штаммы трансформировали с использованием метода ацетата лития согласно Gietz et al. (1995). Для функционального анализа комплементации дрожжевые клетки выращивали в течение ночи в жидкой полной синтетической среде для выпадения (0,7% азотистого основания дрожжей без аминокислот, 2% глюкозы) без соответствующих ауксотрофных маркеров. Серийные разведения того же количества клеток высевали на планшеты YPD (1% дрожжевой экстракт, 2% пептон, 2% глюкоза) или YPG (1% дрожжевой экстракт, 2% пептон, 2% глицерин) и инкубировали при 30 ° C или 37 ° C в течение 3 дней.

Выделение митохондрий и хлоропластов

Для экспериментов с SDS-PAGE и BN-PAGE митохондрии выделяли из водных культур Arabidopsis в соответствии с Day et al. (1985). Обычно из каждого препарата получали 1 мг митохондриального белка. Выделение митохондрий дрожжей проводили согласно Daum et al. (1982). Выделение хлоропластов проводили с использованием набора Chloroplast Isolation Kit (Sigma Aldrich). Концентрацию белка определяли с помощью DC Protein Assay (Bio-Rad).

Фракционирование митохондрий

Сотня микрограмм митохондриальных белков из линий oct1flag ^OE , imp1agfp ^OE , atp23flag ^OE линий суспендировали в 200 мкл 0,1 М Na ₂ CO _{3 суспензию обрабатывали ультразвуком трижды в течение 10 с на льду с последующим центрифугированием при 100000 × g в течение 60 мин. Полученный осадок (мембранная фракция) и супернатант (растворимая фракция) непосредственно растворяли в буфере для образцов для электрофореза.Митохондрии из oma1flag ^OE суспендировали в 200 мкл 0,1 М Na ₂ CO ₃, pH 10,7, и непосредственно центрифугировали. После этого полученный осадок и супернатант растворяли в буфере для образцов для электрофореза с добавлением 8 М мочевины.}

BN-PAGE и анализы активности в геле

Одномерный электрофорез в голубом нативном геле (BN-PAGE) и каталитическое окрашивание комплексов митохондриальной дыхательной цепи проводили, как описано в Kolodziejczak et al.(2007). Полосы количественно оценивали с использованием программного обеспечения ImageJ ¹. Двумерный BN-PAGE проводили, как описано у Piechota et al. (2010).

SDS-PAGE и анализ иммуноблоттинга

Экстракты общего белка (30 мкг) или митохондриальные белки (30 мкг) разделяли на SDS-PAGE согласно Laemmli (1970) с использованием 12% геля (если не указано иное), а затем переносили на мембрану из нитроцеллюлозы или PVDF (Bio-Rad). Блоты исследовали с использованием первичных антител, перечисленных в дополнительной таблице S5.Были использованы вторичные антитела против кролика или мыши, конъюгированные с пероксидазой хрена, и сигнал визуализировали с помощью усиленного хемилюминесцентного реагента ECL (Advansta) и имидж-сканера GBox (Syngene).

Количественный анализ ПЦР в реальном времени

Тотальную РНК экстрагировали из листьев 4-недельных растений с использованием набора GeneMATRIX Universal RNA Purification Kit (EURx). Анализ обратной транскрипции и количественное определение мРНК выполняли с помощью количественной ОТ-ПЦР, как описано ранее (Kwasniak et al., 2013). Растения дикого типа служили калибратором, а ген ACT2 (At3g18780) использовали в качестве эталона. Данные анализировали с помощью программного обеспечения LightCycler версии 4.0 (Roche Diagnostics). Все праймеры, используемые для qRT-PCR, перечислены в дополнительной таблице S6.

Анализ дыхания

Дыхание изолированных митохондрий 2-недельных проростков дикого типа и проростков oma1-1 , выращенных при LD, 22 ° C, регистрировали с помощью кислородного электрода Кларка (Hansatech).Измерения проводили при 25 ° C в инкубационном буфере, содержащем 0,3 М маннита, 10 мМ TES-KOH (pH 7,5), 3 мМ MgSO ₄, 10 мМ NaCl, 5 мМ KH ₂ PO ₄ и 0,1 % BSA. Сукцинат (SA) в концентрации 5 мМ и НАДН в концентрации 1 мМ были респираторными субстратами. К инкубационной среде добавляли 0,5 мМ АТФ и 2 мМ SHAM для обеспечения полной активности SDH и для блокирования опосредованного AOX потребления кислорода, соответственно. Дыхание, стимулированное АДФ (состояние 3), измеряли в присутствии 0.2 мМ АДФ. Чтобы оценить продукцию АТФ изолированными митохондриями, добавляли олигомицин А (2 мкг / мл) для ингибирования синтеза АТФ.

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием Microsoft Excel. Планки погрешностей представляют собой стандартное отклонение (SD) по крайней мере трех независимых экспериментов. Статистическая значимость оценивалась с использованием критерия Стьюдента t и считалась значимой при p ≤ 0,05.

Результаты

Митохондриальная локализация гомологов дрожжевых АТФ-независимых пептидаз Arabidopsis

В предыдущем отчете путем сравнения последовательностей мы показали, что геном Arabidopsis содержит гомологи всех известных дрожжевых АТФ-независимых пептидаз, за исключением дрожжевой тиоламинопептидазы (Lap3) (Kwasniak et al., 2012). Помимо присутствия уже известных растительных АТФ-независимых пептидаз, таких как MPP, RBL12 и PREP, анализ in silico выявил присутствие каждого из гомологов дрожжевого Oct1 (At5g51540), Icp55 (At1g09300), Atp23 (At3g03420). , Oma1 (At5g51740) и Prd1 (At5g65620), а также шесть гомологов Imp (At1g53530, At3g08980, At1g23465, At1g29960, At1g06870 и At2g31140) в геноме A. thaliana . Недавно предсказанные гомологи дрожжевого Prd1 (AtOOP), Icp55 (AtICP55) и Oct1 (AtOCT1) были экспериментально идентифицированы в митохондриях Arabidopsis (Kmiec et al., 2013; Кэрри и др., 2015; Хуанг и др., 2015). В настоящем исследовании мы исследовали митохондриальную локализацию оставшихся ожидаемых АТФ-независимых протеаз, а именно Atp23 (AtATP23), Oma1 (AtOMA1) и выбранных гомологов Imp (AtIMP1a, AtIMP1b и AtIMP2). Кроме того, чтобы изучить возможное нацеливание AtOCT1 в хлоропласты (Kleffmann et al., 2004), мы решили определить субклеточное нацеливание AtOCT1, даже несмотря на то, что его митохондриальная локализация была недавно доказана путем импорта in vitro в митохондрии, изолированные из Arabidopsis (Carrie et al., 2015). Мы исключили три гомолога Imp (At1g29960, At1g06870 и At3g08980) из этого исследования, учитывая их немитохондриальную локализацию, основанную на исследованиях прогнозов и протеомных данных (Feiz et al., 2006; Ni et al., 2010; Hooper et al., 2014). Принимая во внимание наличие диагностического мотива RX5P в Imp1 и NX5S в Imp2 (Burri et al., 2005), мы смогли различить растительные гомологи дрожжевого Imp1 (AtIMP1a и AtIMP1b) и Imp2 (AtIMP2) (дополнительный рисунок S1). ). Номенклатура растительных протеаз, проанализированных в этом исследовании, применительно к дрожжевым ферментам, приведена в таблице 1.

ТАБЛИЦА 1. Номенклатура, локализация и функциональная комплементация в АТФ-независимых протеазах дрожжей Arabidopsis, исследованных в этой работе.

Для проверки предсказанной локализации митохондрий использовались два подхода. В первом подходе конструкции, содержащие зеленый флуоресцентный белок (GFP), слитый с С-концом полноразмерных кодирующих последовательностей протеаз, использовали для временной экспрессии в протопластах Arabidopsis. Совместная локализация сигнала GFP с митохондриально-специфическим флуоресцентным зондом MitoTracker CMXRos наблюдалась для AtOMA1-GFP, AtOCT1-GFP и AtIMP2-GFP, что позволяет предположить митохондриальную локализацию этих слитых белков (рис. 1A).Однако, используя временную экспрессию, мы не смогли обнаружить сигнал GFP от слитых белков AtIMP1a-GFP и AtIMP1b-GFP, тогда как слитый белок AtATP23-GFP имел тенденцию к агрегированию в сгустки. Во втором подходе мы решили создать трансгенные линии Arabidopsis, конститутивно экспрессирующие C-концевые FLAG-тегированные полноразмерные варианты протеаз AtOMA1, AtOCT1 и AtATP23 и C-концевые GFP-тегированные полноразмерные варианты AtIMP1a, AtIMP1b и AtIMP2. . Нам удалось сгенерировать все строки, за исключением строк, выражающих AtIMP1b-GFP и AtIMP2-GFP.Экспрессию слитых белков контролировали с помощью иммунодетекции (рис. 1В). В случае слитого белка AtIMP1a-GFP использовались как флуоресцентная микроскопия (рис. 1A), так и иммуноблоттинг (рис. 1B). Обнаружение меток исключительно в митохондриях, но не в хлоропластах, полностью подтвердило результаты анализа временной экспрессии для AtOMA1 и AtOCT1 и четко выявило митохондриальную локализацию меченых вариантов AtATP23 и AtIMP1a (рис. 1B). В таблице 1 приведены результаты, полученные в результате эксперимента по локализации.

РИСУНОК 1. Митохондриальная локализация протеаз AtOMA1, AtOCT1, AtIMP1a, AtIMP2 и AtATP23. (A) Флуоресцентная визуализация протопласта Arabidopsis, экспрессирующего полноразмерную последовательность протеазы, слитой с GFP. Локализация AtOMA1, AtOCT1 и AtIMP2 была выполнена с использованием временной экспрессии, в то время как AtIMP1a конститутивная экспрессия GFP-слитого белка. Митохондрии выявляли окрашиванием Mito Tracker, в то время как хлоропласты выделяли по распределению аутофлуоресценции хлорофилла.Флуоресцентные сигналы GFP были объединены с Mito Tracker или одновременно с Mito Tracker и автофлуоресценцией хлорофилла. Масштабная линейка = 10 мкм. (B) Обнаружение FLAG-меченных AtOMA1, AtOCT1, AtATP23 и GFP-меченных AtIMP1a в митохондриях (M) и хлоропластах (C), выделенных из стабильных трансформантов A. thaliana . (C) Фракционирование митохондрий, выделенных из стабильных трансформантов A. thaliana , как в (B) . Сокращения: (S) фракция растворимого белка, (P) pellet — фракция мембранного белка митохондрий.Антитела, используемые в (B, C) , были анти-FLAG, анти-GFP, анти-VDAC1-5 (митохондриальный маркер), анти-LHCB (маркер хлоропластов), анти-FTSh20 (маркер внутренней митохондриальной мембраны), анти- Cyt c (Cytochrome c , маркер митохондриального межмембранного пространства).

Затем мы фракционировали митохондрии, выделенные из линий Arabidopsis, конститутивно экспрессирующих меченые слитые протеазы, чтобы проверить, являются ли исследуемые ферменты растворимыми или локализованы на мембране.Подобно своим дрожжевым аналогам, AtATP23 вел себя как слабо связанный с внутренней мембраной Cyt c , тогда как AtOMA1 и AtIMP1a были обнаружены во фракции мембранного белка (рис. 1C). Удивительно, но вместе с мембранными белками был обнаружен AtOCT1. Этот результат противоречит матричной локализации гомолога AtOCT1 в митохондриях дрожжей (Figure 1C) (Isaya et al., 1994).

Функциональная комплементация в дрожжевых мутантах

Чтобы проверить, сходна ли функция митохондриальных АТФ-независимых протеаз Arabidopsis с их дрожжевыми аналогами, на дрожжах был проведен анализ функциональной комплементации.Мы протестировали протеазы Arabidopsis, идентифицированные в этом исследовании (AtIMP1a, AtIMP2, AtATP23 и AtOMA1) (рисунки 2A, B) вместе с AtOCT1 и AtICP55, АТФ-независимыми протеазами, описанными ранее Carrie et al. (2015) и Хуанг и др. (2015) (Рисунок 2C). Фенотипы дрожжевых мутантов, лишенных соответствующей протеазы, растущие на неферментируемых источниках углерода, описаны в следующих публикациях: imp1Δ и imp2Δ (Burri et al., 2005), oct1Δ (Isaya et al., 1994), atp23Δ (Osman et al., 2007; Zeng et al., 2007), oma1Δcoa2Δ (Khalimonchuk et al., 2012) и icp55Δ (Vögtle et al., 2009). После трансформации присутствие HA-меченых протеаз Arabidopsis в мутантных митохондриях дрожжей подтверждали иммуноблоттингом (дополнительная фигура S2). Однако белок Arabidopsis ATP23 не мог стабильно экспрессироваться до тех пор, пока он не был слит с митохондриальной нацеливающей последовательностью, полученной из дрожжевого белка цитохрома b2 (Cyb2) (дополнительный рисунок S2B).

РИСУНОК 2. Функциональная комплементация дрожжевых мутантов, лишенных соответствующей АТФ-независимой протеазы, по гомологу растения. (A) Мутанты с делецией дрожжей трансформировали плазмидой, несущей полноразмерную кодирующую последовательность протеазы растений или кодирующую последовательность протеазы дрожжей в качестве положительного контроля. Десятикратные серийные разведения дрожжевых клеток наносили на чашки с богатой средой, содержащей 2% глицерина (YPG), и инкубировали при указанной температуре в течение 3 дней.Мутанты дикого типа и дрожжевые делеции, несущие пустую плазмиду, были нанесены в качестве контроля (вектора). (B) дрожжевые мутанты atp23Δ трансформировали плазмидой, несущей либо растительный AtATP23 , либо дрожжевой ген ATP23 (положительный контроль). Митохондрии дрожжевых клеток зондировали антителами против Atp6. p, предшественник Atp6; m, зрелая форма Atp6; «-» нетрансформированные atp23Δ клеток. (C) Мутанты с делецией дрожжей трансформировали плазмидой, несущей полноразмерную кодирующую последовательность протеазы растения.Планшетный анализ как в (A) .

Когда дрожжевые нокаутные мутанты, лишенные гена IMP1 или IMP2 , трансформировали конструкциями, несущими их растительные аналоги (AtIMP1a или AtIMP2) , дефект респираторного роста не мог быть восстановлен в дрожжевых клетках, выращенных в среде, содержащей глицерин в качестве источника углерода (среда YPG) (рис. 2А). Точно так же в экспериментах по функциональной комплементации мы обнаружили, что белок AtATP23 не восстанавливает дыхательную функцию дрожжевого мутанта atp23Δ (рис. 2A), а также не может обрабатывать дрожжевой Atp6 (рис. 2B).Кроме того, растительный гомолог Oct1 не может восстанавливать дыхательную функцию у дрожжевого мутанта oct1Δ (рис. 2C), что свидетельствует о функциональном расхождении между растительными и дрожжевыми белками, что также постулировалось ранее (Carrie et al., 2015) .

В отличие от приведенных выше результатов, AtOMA1 и AtICP55 смогли заменить свои дрожжевые гомологи в анализах функциональной комплементации. Сообщалось, что истощение Oma1 приводит к прогрессирующему нарушению дыхательной функции у стареющих мутантов oma1Δ (Bohovych et al., 2015). Однако те же результаты не были получены в повторных экспериментах. Поэтому мы решили использовать другую функциональную систему комплементации, дрожжевой мутант, лишенный как Oma1, так и Coa2 (фактор сборки для биогенеза Cox1, необходимый во время созревания цитохрома c оксидазы). Было продемонстрировано, что протеаза Oma1 опосредует деградацию вновь синтезированного несобранного Cox1 в клетках, лишенных фактора сборки Coa2 (Khalimonchuk et al., 2012). Таким образом, недостаток Oma1 в coa2 Δ приводит к стабилизации несобранного Cox1 и восстанавливает дыхательную функцию.Другими словами, в то время как мутант coa2 Δ не способен расти на глицерине, двойной мутант coa2 Δ oma1 Δ демонстрирует рост на средах, содержащих неферментируемые источники углерода. Как можно заключить из фиг. 2A, растительный гомолог Oma1 в coa2 Δ oma1 Δ был способен частично заменить функцию деградации протеазы дрожжей. Также было показано, что протеаза AtICP55 выполняет функцию, аналогичную ее дрожжевому аналогу, что имеет решающее значение для стабильности митохондриальных белков (Carrie et al., 2015; Хуанг и др., 2015). Наши исследования комплементации согласуются с этим предыдущим открытием, поскольку AtICP55 смог восстановить дыхание в поврежденных дрожжевых клетках, лишенных ICP55 (рис. 2C).

Выбор линий вставки Т-ДНК

Чтобы исследовать влияние митохондриальных АТФ-независимых протеаз на рост и развитие растений, мы выбрали гомозиготные линии со вставкой Т-ДНК в интересующий ген. ПЦР-анализ проводили для выбора двух гомозиготных линий для AtATP23, AtOMA1 и AtICP55 и по одной линии для AtIMP1a и AtOCT1 (дополнительный рисунок S3A).Локализация сайтов вставки Т-ДНК в соответствующих генах схематично показана на дополнительном рисунке S4. Мы заметили, что линии вставки для AtICP55 и AtOCT1, идентифицированные нами, отличались от выбранных Carrie et al. (2015) и Хуанг и др. (2015). Мы не смогли идентифицировать вставки Т-ДНК ни в одной из исследованных линий AtIMP2 (SALK_080262, SALK_080280, SALK_080264 и SALK_080272) (дополнительный рисунок S3B). Анализ РНК показал, что полноразмерный транскрипт не был синтезирован в четырех из восьми выбранных гомозиготных линий, включая imp1a-1 (SALK_094274), oma1-1 (SALK_088054C), oct1-1 (SALK_077448), и icp55-1 (GABI_893A04) (дополнительный рисунок S3C).Все эти нулевые мутанты несли вставку Т-ДНК в кодирующей области (дополнительный рисунок S4) и были использованы для дальнейшего анализа.

Характеристика линий вставки Т-ДНК

Анализ прогрессии на основе стадии роста был выполнен для imp1a-1, oma1-1 , oct1-1 и icp55-1 , растущих в оптимальных условиях, в соответствии с методом Boyes et al. (2001). Никаких значительных изменений в развитии не наблюдалось ни у одной из исследованных нокаутных линий (дополнительные рисунки S5A, B).Анализ морфологии проростков показал, что только oma1-1 демонстрирует небольшое уменьшение длины корня (Рисунок 3A, дополнительный рисунок S5C). Браузер Arabidopsis eFP указывает, что экспрессия AtOMA1 индуцируется тепловым стрессом (Winter et al., 2007). Таким образом, мы исследовали рост oma1 — 1 растений, а также других нулевых мутантов при умеренном тепловом стрессе (LD, 30 ° C) (рис. 3A). Рост imp1a-1, oct1-1 и icp55-1 был неотличим от растений дикого типа.Однако oma1-1 выявил сильные фенотипические различия при этом условии: общее уменьшение размера проростков с уменьшением длины корня на 80% по сравнению с растениями дикого типа (рис. 3А). Мы также обнаружили, что растения, лишенные AtOMA1, проявляют повышенную чувствительность к осмотическому стрессу (вызванному высокими концентрациями маннита) и окислительному стрессу (вызванному паракватом) (рис. 3B). Чтобы подтвердить, что наблюдаемые морфологические изменения в oma1-1 были вызваны отсутствием белка AtOMA1, мы провели анализ комплементации путем трансформации линии oma1-1 полноразмерной кДНК At5g51740 (дополнительный рисунок S3D) .Анализ морфологии проростков как в оптимальных, так и в стрессовых условиях показал восстановление фенотипа дикого типа в комплементарных линиях (рис. 3C), таким образом подтверждая, что фенотип мутанта oma1-1 вызван исключительно отсутствием AtOMA1.

РИСУНОК 3. Морфология 10-дневных проростков. (A) WT, oct1-1 , imp1a-1 , oma1-1 , icp55-1 растения, выращенные в условиях длинного дня (LD) при 22 ° C и 30 ° C.Длина корней 10-дневных сеянцев. Средние значения ± стандартное отклонение по крайней мере для трех отдельных растений. ^∗ p ≤ 0,05. (B) WT, oma1-1 и линия комплемента ( Compl-1 ), выращенные в присутствии 300 мМ маннита или 0,05 мкМ параквата. (C) WT, oma1-1 и линия комплемента ( Compl-1 ), выращенные при (LD) 22 ° C и 30 ° C; планка = 1 см.

Система окислительного фосфорилирования (OXPHOS) в митохондриях Arabidopsis, лишенных функциональных протеаз AtIMP1a, AtOMA1, AtOCT1 и AtICP55

Мы исследовали влияние исследуемых протеаз на функциональность системы OXPHOS, используя комбинацию электрофореза в полиакриламидном геле (BN-PAGE) и гистохимического окрашивания в геле для определения ферментативной активности комплексов I, IV и В.Этот анализ показал, что потеря AtIMP1a, AtOCT1 или AtICP55 не вызвала значительных изменений активности и уровня белка исследуемых комплексов у растений, выращенных в оптимальных условиях (дополнительный рисунок S6).

Единственным исключением был мутант oma1-1 , который показал очевидное снижение (~ 50%) активности комплекса V (даже при том, что общий уровень белка оставался неизменным) по сравнению с растениями дикого типа (Фигуры 4A, Б). На функциональность комплекса V также повлияло выращивание растений oma1-1 при 30 ° C (Рисунок 4), что привело к снижению активности на 60% и небольшому, но статистически значимому снижению общего количества белка ( Рисунки 4A, B).Интересно, что уровень белка и активность комплекса IV были немного выше у мутанта (фиг. 4A, B), особенно в оптимальных условиях. Напротив, снижение активности комплекса I и суперкомплекса I + III ₂, которое коррелировало со снижением уровня белка, наблюдалось исключительно в условиях умеренного теплового стресса в oma1-1 . Кроме того, анализ с использованием BN / SDS-PAGE с последующим иммуноблоттингом с антителами, направленными против субъединиц исследуемых комплексов, привел к аналогичным результатам по количеству суперкомплекса I + III ₂ и комплексов I, IV и V в oma1-1 митохондрии в стрессовых условиях (дополнительный рисунок S7).Следует подчеркнуть, что количество белка и активность комплексов OXPHOS были восстановлены до уровней дикого типа в комплементарной линии oma1-1 , таким образом подтверждая, что наблюдаемые дефекты являются результатом дефицита AtOMA1 (рис. 4A).

РИСУНОК 4. Активность и количество комплексов OXPHOS и их субъединиц в митохондриях oma1-1 . (A) Иммунодетекция, окрашивание Кумасси (CBB) и ферментативная активность в геле комплексов митохондриальной дыхательной цепи, разделенных электрофорезом в полиакриламидном геле с голубым природным слоем (BN-PAGE).Митохондрии выделяли из 14-дневных растений WT и oma1-1 , выращенных в оптимальных условиях (LD, 22 ° C) или при повышенной температуре (LD, 30 ° C). (B) Количественная оценка активности и содержания анализируемых комплексов. Уровень белка комплексов I и V определяли количественно на основании окрашивания CBB и иммунодетекции с антителами, направленными против выбранных субъединиц. Количество комплекса IV определяли исключительно на основании обнаружения сигнала от антитела, направленного против COX2.В каждом эксперименте значения относительной активности и обилия белка рассчитывали как процент от объема, определенный для растений дикого типа (установлен равным 100%). (C) Вестерн-блоттинг субъединиц комплекса I, IV и V в выделенной митохондриальной фракции с использованием SDS-PAGE. Показаны репрезентативные иммуноблоты. Количество белка определяли количественно денситометрически, и значения приводятся в процентах от значения, полученного для растений дикого типа (установлено как 100%). Показаны средние значения ± стандартное отклонение по крайней мере из трех независимых экспериментов.Двусторонний тест Стьюдента t использовали для определения статистической значимости различий между мутантами oma1-1 дикого типа и oma1-1 . ^∗ p ≤ 0,05.

Возможных причин изменения количества белков в комплексах могло быть много. Чтобы лучше понять эту проблему, мы количественно оценили количество мРНК, кодирующих репрезентативные компоненты комплексов I, IV и V. На уровни этих транскриптов, как правило, не влияла потеря AtOMA1 как в оптимальных, так и в умеренных условиях теплового стресса, за исключением небольшого увеличение ATP2-3 в оптимальных условиях, coxII при повышенной температуре и CA2 в обоих условиях (дополнительный рисунок S8).Эти данные ясно указывают на то, что снижение количества комплексов OXPHOS у мутанта oma1-1 не было связано с изменениями уровней транскриптов. Точно так же накопление комплекса IV в oma1-1 не было связано с индукцией транскрипции генов, кодирующих его субъединицы, поскольку наблюдался более высокий уровень только одного транскрипта ( coxII ), причем исключительно в условиях повышенных температур.

В отличие от BN-PAGE или BN / SDS-PAGE, обнаружение белков с помощью SDS-PAGE позволяет не только визуализировать сложные собранные субъединицы, но также и несобранные субъединицы.Эксперимент вестерн-блоттинга, представленный на рисунке 4C, показывает, что в митохондриях, лишенных AtOMA1, содержание NAD9 (комплекс I), а также ATP1 и ATP2 (комплекс V) не изменилось в оптимальных условиях роста, тогда как снижение уровня этих субъединиц было обнаруживается в стрессовых условиях. С другой стороны, количество белка субъединицы комплекса IV постоянно увеличивалось в обоих условиях. Таким образом, результаты SDS-PAGE (сложная субъединица) и BN-PAGE (весь комплекс) показали сходство в количестве комплексов OXPHOS.

Чтобы подтвердить аберрантную функциональность OXPHOS в oma1-1 , мы измерили скорость поглощения кислорода митохондриями, изолированными от растений дикого типа и растений oma1-1 , выращенных в оптимальных условиях с сукцинатом и NADH в качестве респираторных субстратов. Мы наблюдали значительно более низкую скорость базального дыхания (состояние 2) в oma1-1 по сравнению с митохондриями дикого типа (рис. 5А). Более того, в то время как частота дыхания в митохондриях дикого типа увеличивалась при добавлении АДФ (состояние 3), митохондрии oma1-1 не могли реагировать на это лечение (рис. 5А).Кроме того, скорость продукции АТФ (измеряемая как скорость дыхания после ингибирования АТФ-синтазы олигомицином А) была снижена у мутанта oma1-1 по сравнению с мутантом дикого типа (фиг. 5В). Таким образом, наши данные показали, что митохондрии oma1-1 показали нарушенную продукцию АТФ и не были способны достичь полной дыхательной способности, даже несмотря на то, что цепь переноса электронов была стимулирована для работы с максимальной скоростью.

РИСУНОК 5. Скорости потребления кислорода (нмоль O ₂ × мин ^-1 × мг белка ^-1) митохондриями, выделенными из 14-дневных растений дикого типа и выращенных растений oma1-1 в оптимальных условиях (LD, 22 ° C). (A) Базальная частота дыхания (состояние 2) и максимальная (состояние 3) активность OXPHOS. (B) Скорость продукции АТФ после ингибирования АТФ-синтазы олигомицином А. Показаны средние значения ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. ^∗∗ p ≤ 0,005; ^∗∗∗ p ≤ 0,0005.

Относительный транскрипт и содержание белка митохондриальных протеаз у исследованных мутантов

Возможно, что потеря одной протеазы компенсируется функциями других протеаз, и поэтому фенотипические изменения не видны.Эта компенсация может быть результатом избыточности митохондриальных протеаз и / или индукции других протеаз на уровне транскрипта и / или белка. Чтобы проверить, объясняет ли эта вторая возможность наблюдаемое отсутствие измененного фенотипа почти у всех исследованных мутантов в оптимальных условиях роста, количество транскриптов большинства известных митохондриально локализованных протеаз было количественно определено с помощью ПЦР в реальном времени (рис. 6А). Неожиданно не наблюдалось четкого транскрипционного ответа от генов, кодирующих различные митохондриальные протеазы у мутантов, лишенных единственной протеазы, за исключением PREP2 , целевой пептид-деградирующей протеазы / олигопептидазы (Kmiec et al., 2014), который был слегка повышен у трех из четырех проанализированных мутантов (рис. 6А). Затем уровень белка нескольких митохондриальных протеаз был оценен с помощью иммуноблоттинга с использованием доступных антител (рис. 6В). Никаких значительных изменений не наблюдалось ни в одной мутантной линии, включая PREP, за исключением FTSh5 в oma1-1 и FTSh20 в imp1a-1 , которые показали увеличение примерно на 50 и 30%, соответственно (Рисунок 6B).

РИСУНОК 6. Уровень экспрессии выбранных генов, кодирующих митохондриальные протеазы у 4-недельных мутантов oct1-1, imp1a-1, icp55-1 и oma1-1 , выращенных при LD, 22 ° C, по сравнению с растения дикого типа. (A) Уровень транскрипта митохондриальных АТФ-независимых и АТФ-зависимых протеаз. Анализ проводился с помощью количественной ПЦР в реальном времени. Относительное количество транскриптов выражается как отношение log2. Показаны средние значения ± стандартное отклонение из четырех независимых экспериментов. (B) Содержание протеаз PREP (PREP1 и PREP2), OOP, RBL12, FTSh4, FTSh20 и FTSh5 в митохондриях WT и изученных мутантов. Ponceau S служит для контроля загрузки. На гель наносили 30 мкг митохондриального белка.Количество белка определяли количественно денситометрически, и значения приводятся в процентах от значения, полученного для растений дикого типа (установлено как 100%). Показаны средние значения ± стандартное отклонение из трех независимых экспериментов. ^∗ p ≤ 0,05.

Обсуждение

Внутримитохондриальный протеолиз имеет решающее значение для поддержания функционального состояния митохондриального протеома. Сообщалось, что недостаток некоторых митопротеаз сильно влияет на митохондриальные процессы, а также на общий рост и развитие растений (Rigas et al., 2009; Kmiec et al., 2013; Zhang et al., 2014; Smakowska et al., 2016). Основная цель этого исследования состояла в том, чтобы идентифицировать такие протеазы, функционирующие в АТФ-независимой протеолитической системе, но сначала нам нужно было проверить их предсказанную митохондриальную локализацию.

В настоящем исследовании мы экспериментально доказали присутствие четырех гомологов дрожжевых АТФ-независимых митохондриальных протеаз в митохондриях Arabidopsis: AtIMP1a, AtIMP2, AtATP23 и AtOMA1 (Таблица 1). В дрожжах протеаза Imp состоит из двух каталитических субъединиц, тогда как геном Arabidopsis содержит шесть ортологов для этого гена.Принимая во внимание наличие характерного для этих белков мотива последовательности (Burri et al., 2005), мы смогли различить растительные гомологи дрожжевого Imp1 (AtIMP1a и AtIMP1b) и Imp2 (AtIMP2). Нацеливание на митохондрии может быть подтверждено только для AtIMP1a и AtIMP2. Однако мы не исключаем возможности того, что AtIMP1b также кодирует митохондриальные белки.

Мы также показали, что, как и их дрожжевые аналоги, AtIMP1a и AtOMA1 являются интегральными мембранными ферментами, тогда как AtATP23 представляет собой мембранно-связанный белок.Неожиданно мы обнаружили, что протеаза AtOCT1 является интегральным мембранным белком, в отличие от матричной локализации дрожжевых и человеческих гомологов. Этот последний вывод подтверждается анализом с использованием программного обеспечения OCTOPUS (Viklund and Elofsson, 2008), которое предсказывает гидрофобную область внутри C-концевого конца последовательности AtOCT1. Эта область отсутствует у дрожжей и млекопитающих (дополнительная таблица S1).

Протеазы Arabidopsis, идентифицированные в этой работе как митохондриальные белки (AtIMP1a, AtIMP2, AtATP23 и AtOMA1), а также две АТФ-независимые митохондриальные протеазы (AtOCT1 и AtICP55), идентифицированные ранее (Carrie et al., 2015; Huang et al., 2015), были проанализированы по гетерологичной экспрессии в Saccharomyces cerevisiae . Из шести растительных гомологов дрожжевых АТФ-независимых протеаз только два, AtICP55 и AtOMA1, смогли заменить отсутствие своих дрожжевых аналогов. Основываясь на успешной функциональной комплементации у дрожжей, мы предположили, что AtICP55, как и его дрожжевой гомолог, стабилизирует митохондриальные белки путем удаления отдельных аминокислот из MPP-процессированных белков (Vögtle et al., 2009), тогда как AtOMA1 может разрушать неправильно свернутые мембранные белки ( Халимончук и др., 2012). Стабилизация митохондриального протеома с помощью Arabidopsis ICP55 была недавно документально подтверждена двумя независимыми исследованиями, отслеживающими аминоконцевые пептиды (Carrie et al., 2015; Huang et al., 2015).

Чтобы оценить важность АТФ-независимых протеаз в общем развитии и морфологии растений, а также проверить их роль в митохондриальной системе OXPHOS, мы решили использовать обратную генетическую стратегию. Однако мутанты с нулевой вставкой Т-ДНК могли быть идентифицированы только для AtIMP1a, AtOMA1, AtOCT1 и AtICP55 (Таблица 1).За исключением мутанта oma1-1 , испытанные линии растений с нокаутом не показали заметных изменений в росте и развитии по сравнению с растениями дикого типа. Отсутствие AtOMA1 не вызывало сильных морфологических изменений в оптимальных условиях роста; однако корни были немного короче по длине. Напротив, в стрессовых условиях было обнаружено резкое замедление роста корней. Точно так же из всех исследованных нулевых мутантов только отсутствие AtOMA1 влияло на функциональность OXPHOS.Отсутствие видимых фенотипических изменений можно объяснить функциональной избыточностью и / или функциональной комплементацией среди митохондриальных протеаз растений. Мы не нашли никаких доказательств, указывающих на четкий функциональный ответ на уровне транскрипта и белка у мутантов, лишенных фенотипических изменений, что позволяет предположить некоторую степень избыточности в митохондриальном протеолитическом аппарате. Таким образом, в отличие от дрожжей, биоэнергетическая функция митохондрий растений и общий рост не могут быть нарушены потерей одной пептидазы, такой как AtIMP1a, AtOCT1 или AtICP55.С другой стороны, наши данные указывают на необходимость AtOMA1 для правильного функционирования комплексов OXPHOS, особенно комплекса V, и для роста корней Arabidopsis.

Нет предыдущих сообщений, указывающих на влияние протеазы OMA1 на активность комплекса V, предполагая, что эта роль AtOMA1 ограничена растениями. Однако сообщалось, что у млекопитающих удаление протеолитических субстратов OMA1, C11orf83 и OPA1 (атрофия зрительного нерва 1), вызывает нарушение сборки комплекса V за счет дестабилизации субъединицы F0 (Patten et al., 2014; Desmurs et al., 2015). Напротив, наши результаты показывают, что дефицит активности комплекса V в oma1-1 в оптимальных условиях роста не вызван дефектом сборки / стабильности; скорее, это вызвано его каталитической недостаточностью. Этот вывод основан на наблюдении, что серьезное снижение активности комплекса V было связано с почти нормальным содержанием этого комплекса на уровне белка (рис. 4). Это характерное нарушение может быть вызвано накоплением ингибитора комплекса V, который связывается с определенными участками комплекса, ингибируя его действие из-за отсутствия протеолитической активности AtOMA1.

В условиях умеренного стресса активность комплекса V была еще сильнее затронута у oma1-1 растений. Это дополнительное снижение активности было пропорционально снижению уровня белка комплекса V, подразумевая, что в стрессовых условиях дефицит функциональности комплекса V в oma1-1 вызван ингибированием активности комплекса и, кроме того, дефектами. в комплексе сборки / стабильности (рисунок 4). Корреляция между количеством белка и уровнями активности комплекса I и суперкомплекса I + III ₂ в oma1-1 в стрессовых условиях предполагает, что механизм, приводящий к ферментативной недостаточности этих комплексов, также связан с дефектом сборки / стабильности.Более того, в отличие от снижения уровней белков комплексов V, I и суперкомплекса I + III ₂ в oma1-1 , наш анализ показал, что комплекс IV накапливается в ответ на недостаток AtOMA1, независимо от условия роста растений. Постоянство активности и численность комплекса IV оценивали с помощью BN-PAGE (рисунки 4A, B), повышенное количество белка COX2 наблюдали с помощью SDS-PAGE (рисунок 4C) и неизменный уровень транскриптов, кодирующих основные субъединицы комплекса IV. был обнаружен с помощью ОТ-ПЦР (дополнительная фигура S8), все эти результаты указывают на то, что наиболее вероятным эффектом отсутствия AtOMA1 является повышенная стабильность комплекса IV.Однако, основываясь на наших экспериментах, мы не можем исключить возможность того, что повышенное содержание комплекса IV в oma1-1 связано с увеличением эффективности трансляции его субъединиц. Контроль сборки / стабильности комплексов OXPHOS с помощью AtOMA1, скорее всего, связан с протеолитической функцией, поскольку шапероноподобный домен не был идентифицирован в OMA1. Таким образом, вероятно, что этот протеолитический контроль связан с фактором (факторами), который регулирует образование / стабилизацию комплексов OXPHOS.

Нарушение биоэнергетической функции митохондрий, вызванное потерей OMA1, также было обнаружено у дрожжей и многоклеточных животных (Bohovych et al., 2015). В отличие от растений, однако, потеря Oma1 в этих организмах влияет на стабильность RSC, не препятствуя отдельным звеньям цепи переноса электронов. В дрожжах протеаза Oma1 контролирует стабильность суперкомплексов III / IV, тогда как в фибробластах мыши она стабилизирует суперкомплексы I / III / IV (Bohovych et al., 2015). Роль этой протеазы в растениях, по-видимому, также связана с тонкой настройкой дыхательной функции, но не с контролем суперкомплексов, содержащих комплекс IV, которые не были идентифицированы в митохондриях Arabidopsis (Dudkina et al., 2006). Идентификация молекулярных основ различий между растениями и другими эукариотами требует дальнейших исследований. В целом, эти открытия устанавливают, что протеаза OMA1 является важным консервативным фактором, который вносит вклад в функциональность цепи переноса электронов у дрожжей и высших животных, а также в систему OXPHOS у растений.

Хорошо известным протеолитическим субстратом OMA1 в митохондриях млекопитающих является протеаза Yme1L, АТФ-зависимая металлопротеиназа, прикрепленная к внутренней мембране (Stiburek et al., 2012; Rainbolt et al., 2015). Результаты вестерн-блоттинга, полученные в этом исследовании, показывают существенное увеличение количества протеазы FTSh5, растительного гомолога Yme1L, на уровне белка в oma1-1 (рис. 6B), что позволяет предположить, что этот белок может находиться под протеолитическим контролем. AtOMA1, как и у млекопитающих. Второе, но не взаимоисключающее объяснение основано на находках, что как Arabidopsis FTSh5 (Kolodziejczak et al., 2007), так и AtOMA1 (настоящее исследование) участвуют в контроле сборки / стабильности комплекса V.В этом случае повышенное количество ФТШ5 могло быть компенсаторной реакцией на недостаток AtOMA1. Оставляя в стороне причину накопления FTSh5 в oma1-1 , следует подчеркнуть, что это накопление происходит в оптимальных условиях, тогда как у млекопитающих деградация Yme1L индуцируется стрессом. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы понять взаимосвязь между протеазами FTSh5 и OMA1 в митохондриях растений.

Заключение

Наше исследование показывает, что в отличие от дрожжей, отсутствие единственной митохондриальной АТФ-независимой протеазы, за исключением AtOMA1, не критично для биоэнергетической функции митохондрий, а также для общего развития и морфологии у Arabidopsis.Наши исследования подчеркивают важность AtOMA1 в поддержании функциональности митохондриальной системы OXPHOS. Его биоэнергетическая роль была подтверждена уровнем активности / изобилия комплексов OXPHOS, а также скоростью дыхания, максимальной емкостью OXPHOS и нарушенной выработкой АТФ. Дальнейшие исследования необходимы для получения детального понимания ассоциации протеазы AtOMA1 с функциональностью системы OXPHOS в митохондриях растений.

Регистрационный номер

Последовательности MmIMP1 и MmIMP2 млекопитающих, используемые на дополнительном рисунке S1, доступны в GenBank под номерами доступа Q96LU5 и Q96T52 соответственно.Номера доступа GenBank для других последовательностей генов и белков перечислены в дополнительных таблицах S2 и S6.

Взносы авторов

HJ и IM разработали исследование. IM, RS-B, MH-C, MK и AG проводили эксперименты. HJ, IM, RS-B, MH-C и MK проанализировали данные. HJ написал статью с использованием IM, RS-B, MH-C и MK. Все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.

Финансирование

Работа поддержана грантом 2011/03 / D / NZ1 / 00562 Национального научного центра Польши.Стоимость публикации была оплачена Вроцлавским центром биотехнологии, программой «Ведущий национальный исследовательский центр (KNOW) на 2014–2018 годы».

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/article/10.3389/fpls.2017.01543/full#supplementary-material

Сноски

http://imagej.nih.gov/ij/
www.euroscarf.de
http://octopus.cbr.su.se/

Список литературы

Ананд Р., Лангер Т. и Бейкер М. Дж. (2013). Протеолитический контроль функции и морфогенеза митохондрий. Biochim. Биофиз. Acta 1833, 195–204. DOI: 10.1016 / j.bbamcr.2012.06.025

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бейкер, М.Дж., Лампе, П. А., Стояновски, Д., Корвиц, А., Ананд, Р., Тацута, Т. и др. (2014). Стресс-индуцированная активация и автокаталитический оборот OMA1 регулируют OPA1-зависимую динамику митохондрий. EMBO J. 33, 578–593. DOI: 10.1002 / embj.201386474

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бохович И., Дональдсон Г., Кристиансон С., Захайко Н., Халимончук О. (2014). Активация металлопротеиназы Oma1, вызванная стрессом, затрагивает ее С-концевую область и важна для защиты митохондрий от стресса у дрожжей. J. Biol. Chem. 289, 13259–13272. DOI: 10.1074 / jbc.M113.542910

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бохович И., Фернандес М. Р., Ран Дж. Дж., Стакли К. Д., Бестман Дж. Э., Анандхан А. и др. (2015). Металлопротеаза OMA1 регулирует биоэнергетическую функцию митохондрий и стабильность дыхательного суперкомплекса. Sci. Rep. 5: 13989. DOI: 10.1038 / srep13989

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Богович, И., Kastora, S., Christianson, S., Topil, D., Kim, H., Fangman, T., et al. (2016). Oma1 связывает контроль качества митохондриального белка и передачу сигналов TOR, чтобы модулировать физиологическую пластичность и реакции клеток на стресс. Мол. Клетка. Биол. 36, 2300–2312. DOI: 10.1128 / MCB.00156-16

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бойс, Д. К., Зайед, А. М., Асчензи, Р., Маккаскилл, А. Дж., Хоффман, Н. Е., Дэвис, К. Р. и др. (2001). Фенотипический анализ Arabidopsis на основе стадии роста: модель для высокопроизводительной функциональной геномики растений. Растительная клетка 13, 1499–1510. DOI: 10.1105 / tpc.13.7.1499

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бранда, С.С., Кавадини, П., Адамек, Дж., Калоусек, Ф., Тарони, Ф., и Исайя, Г. (1999). Дрожжевой и человеческий фратаксин обрабатываются до зрелой формы в два последовательных этапа митохондриальной процессинговой пептидазой. J. Biol. Chem. 274, 22763–22769. DOI: 10.1074 / jbc.274.32.22763

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бурри, Л., Strahm, Y., Hawkins, C.J., Gentle, I.E., Puryer, M.A., Verhagen, A., et al. (2005). Зрелый DIABLO / Smac продуцируется комплексом протеазы IMP на внутренней мембране митохондрий. Мол. Биол. Cell 16, 2926–2933. DOI: 10.1091 / mbc.E04-12-1086

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кэрри К., Венн А. С., Захеди Р. П. и Солл Дж. (2015). Идентификация сайтов расщепления и белков-субстратов для двух митохондриальных промежуточных пептидаз в Arabidopsis thaliana . J. Exp. Бот. 66, 2691–2708. DOI: 10.1093 / jxb / erv064

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Клаф, С. Дж., И Бент, А. Ф. (1998). Цветочный окунание: упрощенный метод Agrobacterium -опосредованной трансформации Arabidopsis thaliana . Plant J. 16, 735–743. DOI: 10.1046 / j.1365-313x.1998.00343.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Даум, Г., Бёни, П. К., и Шац, Г. (1982).Импорт белков в митохондрии. Цитохром b2 и цитохром с пероксидаза расположены в межмембранном пространстве митохондрий дрожжей. J. Biol. Chem. 257, 13028–13033.

Google Scholar

Дэй, Д. А., Нойбургер, М., и Дус, Р. (1985). Биохимическая характеристика митохондрий без хлорофилла из листьев гороха. Funct. Plant Biol. 12, 219–228. DOI: 10.1071 / PP9850219

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Десмюр, М., Фоти, М., Рэми, Э., Ваз, Ф. М., Мартину, Ж.-К., Байрох, А. и др. (2015). C11orf83, митохондриальный кардиолипин-связывающий белок, участвующий в сборке комплекса bc1 и стабилизации суперкомплекса. Мол. Клетка. Биол. 35, 1139–1156. DOI: 10.1128 / MCB.01047-14

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дудкина Н. В., Хайнемейер Дж., Сандерхаус С., Бокема Э. Дж. И Браун Х. П. (2006). Суперкомплексы дыхательной цепи в митохондриальной мембране растений. Trends Plant Sci. 11, 232–240. DOI: 10.1016 / j.tplants.2006.03.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фейз, Л., Иршад, М., Понт-Лезика, Р. Ф., Канут, Х. и Жамет, Э. (2006). Оценка препаратов клеточных стенок для протеомики: новая процедура очистки клеточных стенок от гипокотилей Arabidopsis. Растительные методы 2, 1–13. DOI: 10.1186 / 1746-4811-2-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гах, О., Кавадини П. и Исайя Г. (2002). Пептидазы процессинга митохондрий. Biochim. Биофиз. Acta Mol. Cell Res. 1592, 63–77. DOI: 10.1016 / S0167-4889 (02) 00265-3

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гитц Р. Д., Шистл Р. Х., Виллемс А. Р. и Вудс Р. А. (1995). Исследования трансформации интактных дрожжевых клеток с помощью процедуры LiAc / SS-ДНК / PEG. Дрожжи 11, 355–360. DOI: 10.1002 / yea.320110408

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гольдштейн, А.Л. и Маккаскер Дж. Х. (1999). Три новых кассеты доминантной лекарственной устойчивости для разрушения гена в Saccharomyces cerevisiae . Дрожжи 14, 1541–1553. DOI: 10.1002 / (SICI) 1097-0061 (199910) 15:14 <1541 :: AID-YEA476> 3.0.CO; 2-K

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хупер, К. М., Танц, С. К., Каслден, И., Вашер, М., Смолл, И., и Миллар, А. Х. (2014). SUBAcon: консенсусный алгоритм для унификации данных субклеточной локализации протеома Arabidopsis . Биоинформатика 30, 3356–3364. DOI: 10.1093 / биоинформатика / btu550

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Huang, S., Nelson, C.J., Li, L., Taylor, N.L., Ströher, E., Peteriet, J., et al. (2015). Пептидаза 55 промежуточного расщепления модифицирует аминоконцы фермента и изменяет стабильность белка в митохондриях Arabidopsis . Plant Physiol. 168, 415–427. DOI: 10.1104 / стр.15.00300

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Исая, Г., Kalousek, F., Fenton, W.A., and Rosenberg, L.E. (1991). Расщепление предшественников процессирующей митохондрии пептидазой требует совместимого зрелого белка или промежуточного октапептида. J. Cell Biol. 113, 65–76. DOI: 10.1083 / jcb.113.1.65

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Исая, Г., Миклос, Д., и Роллинз, Р. А. (1994). MIP1, новый дрожжевой ген, гомологичный гену промежуточной пептидазы митохондрий крысы, необходим для окислительного метаболизма в Saccharomyces cerevisiae . Мол. Клетка. Биол. 14, 5603–5616. DOI: 10.1128 / MCB.14.8.5603

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Янска, Х., Пехота, Дж., И Квасняк, М. (2010). АТФ-зависимые протеазы в биогенезе и поддержании митохондрий растений. Biochim. Биофиз. Acta 1797, 1071–1075. DOI: 10.1016 / j.bbabio.2010.02.027

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jaquinod, M., Villiers, F., Kieffer-Jaquinod, S., Hugouvieux, V., Bruley, C., Garin, J., et al. (2007). Протеомическое вскрытие вакуолей Arabidopsis thaliana , выделенных из клеточной культуры. Мол. Клетка. Протеомика 6, 394–412. DOI: 10.1074 / mcp.M600250-MCP200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Жубес, Дж., Де Шуттер, К., Веркест, А., Инзе, Д., и Де Вейлдер, Л. (2004). Условная рекомбиназа-опосредованная экспрессия генов в культурах растительных клеток. Plant J. 37, 889–896.DOI: 10.1111 / j.1365-313X.2004.02004.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Kalousek, F., Hendrick, J.P., and Rosenberg, L.E. (1988). Две протеазы митохондриального матрикса последовательно действуют в процессинге ферментов матрикса млекопитающих. Proc. Natl. Акад. Sci. США 85, 7536–7540. DOI: 10.1073 / pnas.85.20.7536

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кезер, М., Камбачельд, М., Кистерс-Войке, Б., и Лангер, Т.(2003). Oma1, новая мембраносвязанная металлопептидаза в митохондриях, активность которой перекрывается с протеазой m -AAA. J. Biol. Chem. 278, 46414–46423. DOI: 10.1074 / jbc.M305584200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Халимончук, О., Чон, М. Ю., Уоттс, Т., Феррис, Э., и Винг, Д. Р. (2012). Селективный протеолиз, опосредованный протеазой Oma1, субъединицы Cox1 цитохромоксидазы в сборочных мутантах. J. Biol. Chem. 287, 7289–7300. DOI: 10.1074 / jbc.M111.313148

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Kleffmann, T., Russenberger, D., von Zychlinski, A., Christopher, W., Sjölander, K., Gruissem, W., et al. (2004). Протеом хлоропласта Arabidopsis thaliana обнаруживает изобилие путей и новые функции белка. Curr. Биол. 14, 354–362. DOI: 10.1016 / j.cub.2004.02.039

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кмец, Б., Teixeira, P.F., Berntsson, R.P., Murcha, M.W., Branca, R.MM., Radomiljac, J.D., et al. (2013). Органелларная олигопептидаза (ООП) обеспечивает дополнительный путь для нацеливания на деградацию пептидов в митохондриях и хлоропластах. Proc. Natl. Акад. Sci. США 110, E3761 – E3769. DOI: 10.1073 / pnas.1307637110

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кмиец, Б., Тейшейра, П. Ф., и Глейзер, Э. (2014). Уничтожение сигнала: нацеливание на деградацию пептидов в митохондриях и хлоропластах. Trends Plant Sci. 19, 771–778. DOI: 10.1016 / j.tplants.2014.09.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кмец, Б., Урантовка, А., Лех, М., и Янска, Х. (2012). Двухэтапный процессинг предшественника AtFtsh5 митохондриальной процессинговой пептидазой в Arabidopsis thaliana . Мол. Завод 5, 1417–1419. DOI: 10.1093 / mp / sss099

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кмец-Вишневская, Б., Krumpe, K., Urantowka, A., Sakamoto, W., Pratje, E., and Janska, H. (2008). Митохондриальный ромбид растения, AtRBL12, имеет специфичность к субстрату, отличную от его дрожжевого аналога. Plant Mol. Биол. 68, 159–171. DOI: 10.1007 / s11103-008-9359-8

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Колодзейчак М., Гибала М., Урантовка А. и Янска Х. (2007). Значение протеаз Arabidopsis AAA для активности и сборки / стабильности митохондриальных комплексов OXPHOS. Physiol. Растение. 129, 135–142. DOI: 10.1111 / j.1399-3054.2006.00835.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Квасняк, М., Маевски, П., Скибиор, Р., Адамович, А., Чарна, М., Сливинска, Э. и др. (2013). Молчание ядерного гена RPS10 , кодирующего митохондриальный рибосомный белок, изменяет трансляцию в митохондриях Arabidopsis . Растительная клетка 25, 1855–1867. DOI: 10.1105 / tpc.113.111294

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Квасняк, М., Pogorzelec, L., Migdal, I., Smakowska, E., and Janska, H. (2012). Протеолитическая система митохондрий растений. Physiol. Растение. 145, 187–195. DOI: 10.1111 / j.1399-3054.2011.01542.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лэммли, У.К. (1970). Расщепление структурных белков при сборке головки бактериофага Т4. Природа 227, 680–685. DOI: 10.1038 / 227680a0

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Longtine, М.С., Маккензи, А. III, Демарини, Д. Дж., Шах, Н. Г., Вах, А., Брахат, А. и др. (1998). Дополнительные модули для универсальной и экономичной делеции и модификации гена на основе ПЦР в Saccharomyces cerevisiae . Дрожжи 14, 953–961. DOI: 10.1002 / (SICI) 1097-0061 (199807) 14:10 <953 :: AID-YEA293> 3.0.CO; 2-U

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Накагава Т., Судзуки Т., Мурата С., Накамура С., Хино Т., Маэо К. и др. (2007).Улучшенные бинарные векторы Gateway: высокопроизводительные векторы для создания гибридных конструкций в трансгенном анализе растений. Biosci. Biotechnol. Biochem. 71, 2095–2100. DOI: 10.1271 / bbb.70216

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ни, Р. Дж., Шен, З., Янг, К. П., Ву, Ю. Д., Би, Ю. Д. и Ван, Б. С. (2010). Идентификация полиА-связывающих белков с низким содержанием в хлоропласте Arabidopsis с использованием полиА-аффинной колонки. Мол.Биол. Rep. 37, 637–641. DOI: 10.1007 / s11033-009-9478-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Осман, К., Вилмс, К., Тацута, Т., и Лангер, Т. (2007). Prohibitins генетически взаимодействуют с Atp23, новой процессирующей пептидазой и шапероном для F1Fo-ATP-синтазы. Мол. Биол. Cell 18, 627–635. DOI: 10.1091 / mbc.E06-09-0839

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Паттен, Д. А., Вонг, Дж., Хачо, М., Soubannier, V., Mailloux, R.J., Pilon-Larose, K., et al. (2014). OPA1-зависимая модуляция крист необходима для клеточной адаптации к метаболическим потребностям. EMBO J. 33, 2676–2691. DOI: 10.15252 / embj.201488349

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Piechota, J., Kolodziejczak, M., Juszczak, I., Sakamoto, W., and Janska, H. (2010). Идентификация и характеристика высокомолекулярных комплексов, образованных матриксными протеазами AAA и запретами в митохондриях Arabidopsis thaliana . J. Biol. Chem. 285, 12512–12521. DOI: 10.1074 / jbc.M109.063644

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Potting, C., Wilmes, C., Engmann, T., Osman, C., and Langer, T. (2010). Регулирование митохондриальных фосфолипидов с помощью Ups1 / PRELI-подобных белков зависит от протеолиза и Mdm35. EMBO J. 29, 2888–2898. DOI: 10.1038 / emboj.2010.169

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кирос, П. М., Лангер, Т., и Лопес-Отин, К. (2015). Новые роли митохондриальных протеаз в здоровье, старении и болезнях. Нат. Rev. Mol. Cell Biol. 16, 345–359. DOI: 10.1038 / nrm3984

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рейнболт, Т.К., Сондерс, Дж. М., и Вайзман, Р. Л. (2015). Деградация YME1L снижает протеолитическую способность митохондрий во время окислительного стресса. EMBO Rep. 16, 97–106. DOI: 10.15252 / embr.201438976

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Richter, U., Лахтинен, Т., Марттинен, П., Суоми, Ф., и Баттерсби, Б. Дж. (2015). Контроль качества синтеза митохондриального белка необходим для целостности мембран и приспособленности клеток. J. Cell Biol. 211, 373–389. DOI: 10.1083 / jcb.201504062

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Rigas, S., Daras, G., Laxa, M., Marathias, N., Fasseas, C., Sweetlove, L.J., et al. (2009). Роль протеазы Lon1 в послеродовом росте и поддержании функции митохондрий у Arabidopsis thaliana . New Phytol. 181, 588–600. DOI: 10.1111 / j.1469-8137.2008.02701.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Smakowska, E., Skibior-Blaszczyk, R., Czarna, M., Kolodziejczak, M., Kwasniak-Owczarek, M., Parys, K., et al. (2016). Недостаток протеазы FTSh5 влияет на карбонилирование белков, морфологию митохондрий и содержание фосфолипидов в митохондриях Arabidopsis: новый взгляд на сложное взаимодействие. Plant Physiol. 171, 2516–2535.DOI: 10.1104 / стр. 16.00370

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стибурек Л., Цеснекова Ю., Косткова О., Форнуськова Д., Винсова К., Венчич Л. и др. (2012). YME1L контролирует накопление субъединиц дыхательной цепи и необходим для устойчивости к апоптозу, морфогенеза крист и пролиферации клеток. Мол. Биол. Cell 23, 1010–1023. DOI: 10.1091 / mbc.E11-08-0674

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Танц, С.К., Каслден И., Хупер К. М., Смолл И. и Миллар А. Х. (2014). Использование субклеточной базы данных для белков Arabidopsis для локализации семейства протеаз Deg. Фронт. Plant Sci. 5: 396. DOI: 10.3389 / fpls.2014.00396

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ван Муллем, В., Уери, М., Де Болле, X., и Ванденхаут, Дж. (2003). Конструирование набора векторов Saccharomyces cerevisiae , предназначенных для рекомбинационного клонирования. Дрожжи 20, 739–746. DOI: 10.1002 / yea.999

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

ван Вейк, К. Дж. (2015). Созревание и протеолиз белков в пластидах, митохондриях и пероксисомах растений. Annu. Rev. Plant Biol. 66, 75–111. DOI: 10.1146 / annurev-arplant-043014-115547

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Виклунд, Х., Элофссон, А. (2008). ОСЬМИНОГ: улучшение прогнозирования топологии за счет двухканальных оценок предпочтений на основе ИНС и расширенной топологической грамматики. Bioinforma 24, 1662–1668. DOI: 10.1093 / биоинформатика / btn221

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Vögtle, F. N., Wortelkamp, S., Zahedi, R.P., Becker, D., Leidhold, C., Gevaert, K., et al. (2009). Общий анализ митохондриального N-протеома определяет процессинговую пептидазу, критическую для стабильности белка. Cell 139, 428–439. DOI: 10.1016 / j.cell.2009.07.045

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Винтер, Д., Уксус, Б., Нахал, Х., Аммар, Р., Уилсон, Г. В., и Проварт, Н. Дж. (2007). «электронная флуоресцентная пиктограмма». PLOS ONE 2: e718. DOI: 10.1371 / journal.pone.0000718

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ю, С.-Д., Чо, Ю.-Х., и Шин, Дж. (2007). Протопласты мезофилла Arabidopsis: универсальная клеточная система для анализа временной экспрессии генов. Нат. Protoc. 2, 1565–1572. DOI: 10.1038 / nprot.2007.199

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цзэн, X., Neupert, W., and Tzagoloff, A. (2007). Металлопротеаза, кодируемая ATP23 , выполняет двойную функцию в процессинге и сборке субъединицы 6 митохондриальной АТФазы. Мол. Биол. Cell 18, 617–626. DOI: 10.1091 / mbc.E06-09-0801

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhang, S.C., Wu, J. L., Yuan, D. K., Zhang, D. W., Huang, Z. G., Xiao, L. T., et al. (2014). Нарушение гомеостаза ауксина, вызванное митохондриальным геном FtSh5 -опосредованным накоплением пероксидазы, регулирует архитектуру Arabidopsis . Мол. Завод 7, 856–873. DOI: 10.1093 / mp / ssu006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Отвратительные запахи влияют на характеристики адаптивной силы в отличие от нейтральных и приятных запахов

1.
Фердензи, К., Фурнель, А., Тевен, М., Коппин, Г. и Бенсафи, М. Просмотр обонятельных аффективных реакций через призму запаха: влияние параметров восприятия и возраста на обонятельные реакции на запахи. Фронт. Psychol. https://doi.org/10.3389/fpsyg.2015.01776 (2015).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

2.
Johnson, B. N., Mainland, J. D. & Sobel, N. Быстрая обработка обоняния подразумевает подкорковый контроль обонятельной системы. J. Neurophysiol. 90 , 1084–1094. https://doi.org/10.1152/jn.00115.2003 (2003).
Артикул PubMed Google ученый

3.
Doty, R. L. Olfaction. Annu. Rev. Psychol. 52 , 423–452. https://doi.org/10.1146/annurev.psych.52.1.423 (2001).
CAS Статья PubMed Google ученый

4.
Пинто, Дж. М. Olfaction. Proc. Являюсь. Грудной. Soc. 8 , 46–52. https://doi.org/10.1513/pats.201005-035RN (2011).
ADS Статья PubMed Google ученый

5.
Gire, D. H. et al. Временная обработка в обонятельной системе: можем ли мы увидеть запах ?. Нейрон 78 , 416–432. https://doi.org/10.1016/j.neuron.2013.04.033 (2013).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

6.
Шеперд, Г. М. Синаптическая организация мозга (Oxford University Press, 2004).

7.
Моркрафт Р.J. & Tanjii, J. Цингулофронтальные взаимодействия и двигательные области поясной извилины. In Cingulate Neurobiology and Disease (ed. Vogt, B.) 113–144 (Oxford University Press, 2009).

8.
Сагасп П., Шварц С. и Вюйомье П. Страх и остановка: роль миндалины в моторном торможении эмоциональными сигналами. Neuroimage 55 , 1825–1835. https://doi.org/10.1016/j.neuroimage.2011.01.027 (2011).
Артикул PubMed Google ученый

9.
Леду, Дж. Э. Эмоциональные контуры в головном мозге. Annu. Rev. Neurosci. 23 , 155–184. https://doi.org/10.1146/annurev.neuro.23.1.155 (2000).
CAS Статья PubMed Google ученый

10.
Уоррен Д. У., Уокер Дж. К., Дрейк А. Ф. и Лутц Р. В. Влияние одорантов и раздражителей на респираторное поведение. Ларингоскоп 104 , 623–626. https://doi.org/10.1002/lary.5541040517 (1994).
CAS Статья PubMed Google ученый

11.
Уокер Дж. С. Реакции человека на пропионовую кислоту. II. Количественная оценка дыхательных реакций и их отношения к восприятию. Chem. Чувства 26 , 351–358. https://doi.org/10.1093/chemse/26.4.351 (2001).
CAS Статья PubMed Google ученый

12.
Франк, Р. А., Дулай, М. Ф. и Гестеланд, Р. С. Оценка теста на величину запаха как клинического теста обонятельной функции. Physiol. Behav. 78 , 195–204. https://doi.org/10.1016/S0031-9384(02)00965-4 (2003).
CAS Статья PubMed Google ученый

13.
Bensafi, M. et al. Ольфактомоторная активность во время изображения имитирует активность во время восприятия. Нат. Neurosci. 6 , 1142–1144. https://doi.org/10.1038/nn1145 (2003).
CAS Статья PubMed Google ученый

14.
Sobel, N. et al. Активация мозжечка человека, вызванная запахом и запахом. J. Neurosci. 18 , 8990–9001. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.18-21-08990.1998 (1998).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

15.
Сакума, К., Накашима, К. и Такахаши, К. Обонятельные вызванные потенциалы при болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера и у пациентов с аносмией. Psychiatry Clin. Neurosci. 50 , 35–40. https://doi.org/10.1111/j.1440-1819.1996.tb01660.x (1996).
CAS Статья PubMed Google ученый

16.
Derjean, D. et al. Новый нейронный субстрат для преобразования обонятельных входов в моторные выходы. PLoS Biol. 8 , e1000567. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1000567 (2010).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

17.
Эрлихман, Х., Браун, С., Чжу, Дж. И Уорренбург, С. Модуляция рефлекса вздрагивания при воздействии приятных и неприятных запахов. Психофизиология 32 , 150–154. https://doi.org/10.1111/j.1469-8986.1995.tb03306.x (1995).
CAS Статья PubMed Google ученый

18.
Sakamoto, Y. et al. Профилактика падений с использованием обонятельной стимуляции с запахом лаванды у пожилых жителей дома престарелых: рандомизированное контролируемое исследование. J. Am. Гериатр. Soc. 60 , 1005–1011. https://doi.org/10.1111/j.1532-5415.2012.03977.x (2012).
Артикул PubMed Google ученый

19.
Смит, К. Дж., Скотт, С. М. и Райан, Б. А. Сердечно-сосудистые эффекты запахов. Toxicol. Инд. Здравоохранения 15 , 595–601. https://doi.org/10.1177/074823379

0701 (1999).
CAS Статья PubMed Google ученый
20.
Нагаи, М., Вада, М., Усуи, Н., Танака, А. и Хасебе, Ю. Приятные запахи уменьшают повышение артериального давления во время ритмичного захвата руки у людей. Neurosci. Lett. 289 , 227–229.https://doi.org/10.1016/S0304-3940(00)01278-7 (2000).
CAS Статья PubMed Google ученый
21.
Соундхарараджан К. и Ким С. Влияние ароматов на психофизиологическую активность человека: особое внимание уделяется электроэнцефалографической реакции человека. Sci. Pharm. 84 , 724–751. https://doi.org/10.3390/scipharm84040724 (2016).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
22.
Барон, Р. А. и Томли, Дж. Дыхание реальности: положительный эффект как потенциальный посредник воздействия приятных ароматов на выполнение задач и оказание помощи. Environ. Behav. 26 , 766–784. https://doi.org/10.1177/00134266003 (1994).
Артикул Google ученый
23.
Гласс, С. Т., Лингг, Э. и Хойбергер, Э. Вызывают ли окружающие городские запахи основные эмоции ?. Фронт. Psychol. https: // doi.org / 10.3389 / fpsyg.2014.00340 (2014).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
24.
Шиффман, С. С. Запахи домашнего скота: влияние на здоровье и благополучие человека. J. Anim. Sci. 76 , 1343. https://doi.org/10.2527/1998.7651343x (1998).
CAS Статья PubMed Google ученый
25.
Шефер Л.В., Биттманн, Ф. Н., Мюллер, Д. и Филхо, П. Парное личное взаимодействие выявляет объективные различия между толчками и удержанием изометрических мышечных движений. PLoS One 16 (5), e0238331. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0238331 (2021 г.).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
26.
Шефер, Л. В. и Биттманн, Ф. Н. Существуют ли две формы изометрического действия мышц? Результаты экспериментального исследования подтверждают различие между удерживающей и толкающей изометрической функцией мышц. BMC Sports Sci. Med. Rehabil. 9 , 11. https://doi.org/10.1186/s13102-017-0075-z (2017).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
27.
Хантер, С. К., Райан, Д. Л., Ортега, Дж. Д. и Энока, Р. М. Различия в задачах с одним и тем же моментом нагрузки изменяют время выносливости субмаксимальных сокращений от утомления у людей. J. Neurophysiol. 88 , 3087–3096. https: // doi.org / 10.1152 / jn.00232.2002 (2002).
Артикул PubMed Google ученый
28.
Рудрофф, Т., Джастис, Дж. Н., Холмс, М. Р., Мэтьюз, С. Д. и Энока, Р. М. Активность мышц и время до невыполнения задания различаются в зависимости от податливости нагрузки и целевой силы для мышц сгибателей локтя. J. Appl. Physiol. 110 , 125–136. https://doi.org/10.1152/japplphysiol.00605.2010 (2011 г.).
Артикул PubMed Google ученый
29.
Рудрофф, Т., Барри, Б. К., Стоун, А. Л., Барри, К. Дж. И Энока, Р. М. Активность дополнительных мышц способствует изменению времени до отказа от выполнения задания для разных положений рук и нагрузок. J. Appl. Physiol. 102 , 1000–1006. https://doi.org/10.1152/japplphysiol.00564.2006 (2007).
Артикул PubMed Google ученый
30.
Rudroff, T. et al. ПЭТ / КТ-визуализация возрастных и связанных с задачами различий в мышечной активности во время утомительных сокращений. J. Appl. Physiol. 114 , 1211–1219. https://doi.org/10.1152/japplphysiol.01439.2012 (2013 г.).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
31.
Гарнер, Дж. К., Блэкберн, Т., Веймар, В. и Кэмпбелл, Б. Сравнение электромиографической активности во время изометрических сокращений с эксцентрической и концентрической нагрузкой. J. Electromyogr. Кинезиол. 18 , 466–471.https://doi.org/10.1016/j.jelekin.2006.11.006 (2008).
Артикул PubMed Google ученый
32.
Enoka, R.M. Эксцентрические сокращения требуют уникальных стратегий активации нервной системы. J. Appl. Physiol. 81 , 2339–2346. https://doi.org/10.1152/jappl.1996.81.6.2339 (1996).
CAS Статья PubMed Google ученый
33.
Duchateau, J. & Enoka, R.M. Нейронный контроль сокращения и удлинения сокращений: влияние ограничений задачи: сокращение и удлинение сокращений. J. Physiol. 586 , 5853–5864. https://doi.org/10.1113/jphysiol.2008.160747 (2008).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
34.
Duchateau, J. & Enoka, R.M. Нейронный контроль удлинения сокращений. J. Exp. Биол. 219 , 197–204. https://doi.org/10.1242/jeb.123158 (2016).
Артикул PubMed Google ученый
35.
Duchateau, J. & Baudry, S. Понимание нейронного контроля эксцентрических сокращений. J. Appl. Physiol. 116 , 1418–1425. https://doi.org/10.1152/japplphysiol.00002.2013 (2014).
Артикул PubMed Google ученый
36.
Пфлюгер, Х. Дж. И Силлар, К. Управление двигателем. In Neuroscities — From Molecule to Behavior: A University Textbook (eds Galizia, C.G. & Lledo, P.-M.) 479–524 (Springer, 2013).
37.
Huggenberger, S. et al. Neuroanatomie des Menschen: mit 202 größtenteils farbigen Abbildungen (Springer, 2019).
Книга Google ученый
38.
Деч, С., Биттманн, Ф. Н.И Шефер, Л. В. Оценка адаптивной силы разгибателей локтя у здоровых субъектов, определяемая с помощью новой системы измерения с пневматическим приводом, с учетом критериев качества. Диагностика 11 , 923. https://doi.org/10.3390/diagnostics11060923 (2021).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
39.
Bittmann, F. N., Dech, S., Aehle, M. & Schaefer, L. V.Ручное мышечное тестирование — профили силы и их воспроизводимость. Диагностика 10 , 996. https://doi.org/10.3390/diagnostics10120996 (2020).
Артикул PubMed Central Google ученый
40.
Hoff, M., Schaefer, L., Heinke, N. & Bittmann, F. Отчет об адаптивной силе, специфической нервно-мышечной функции. евро. J. Transl. Myol. 25 , 183. https://doi.org/10.4081/ejtm.2015.5183 (2015).
Артикул Google ученый
41.
Шефер, Л., Хофф, М. и Биттманн, Ф. Измерительная система и метод определения адаптивной силы. евро. J. Transl. Myol. https://doi.org/10.4081/ejtm.2017.6479 (2017).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
42.
Caligiore, D. et al. Консенсусный документ: На пути к системному взгляду на функцию мозжечка: взаимодействие между мозжечком, базальными ганглиями и корой. Мозжечок 16 , 203–229. https://doi.org/10.1007/s12311-016-0763-3 (2017).
Артикул PubMed Google ученый
43.
Ishikawa, T., Tomatsu, S., Izawa, J. & Kakei, S. Мозжечок: могут ли это быть локусы передних моделей ?. Neurosci. Res. 104 , 72–79. https://doi.org/10.1016/j.neures.2015.12.003 (2016).
Артикул PubMed Google ученый
44.
Zobel, S. et al. Вовлечение вентролатерального таламуса человека в обоняние. J. Neurol. 257 , 2037–2043. https://doi.org/10.1007/s00415-010-5656-7 (2010).
CAS Статья PubMed Google ученый
45.
Судри, Ю., Лемонь, К., Малинво, Д., Консоли, С.-М. И Бонфилс, П. Обонятельная система и эмоции: общие субстраты. евро. Анна. Оториноларингол. Голова Шея Дис. 128 , 18–23. https://doi.org/10.1016/j.anorl.2010.09.007 (2011).
CAS Статья PubMed Google ученый
46.
Delplanque, S. et al. Эмоциональная обработка запахов: свидетельство нелинейной связи между оценками приятности и знакомства. Chem. Чувства 33 , 469–479. https://doi.org/10.1093/chemse/bjn014 (2008 г.).
Артикул PubMed Google ученый
47.
Вебер С. Т. и Хойбергер Э. Влияние естественных запахов на аффективные состояния человека. Chem. Чувства 33 , 441–447. https://doi.org/10.1093/chemse/bjn011 (2008 г.).
Артикул PubMed Google ученый
48.
Вандервольф, К. Х. Гиппокамп как ольфактомоторный механизм: были ли все-таки правы классические анатомы ?. Behav. Brain Res. 127 , 25–47. https: // doi.org / 10.1016 / S0166-4328 (01) 00354-0 (2001).
CAS Статья PubMed Google ученый
49.
Конейбл К. М. и Рознер А. Л. Повествовательный обзор ручного мышечного тестирования и его значение для исследования мышечного тестирования. J. Chiropractic Med. https://doi.org/10.1016/j.jcm.2011.04.001 (2011).
Артикул Google ученый
50.
Шефер, Л.В., Торик, А. Х., Матушек, Х., Хольшнайдер, М. и Биттманн, Ф. Н. Синхронизация мышечных колебаний между двумя субъектами во время изометрического взаимодействия. евро. J. Transl. Myol. 24 , 2237. https://doi.org/10.4081/ejtm.2014.2237 (2014).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
51.
Шефер, Л. В. и Биттманн, Ф. Н. Когерентное поведение нервно-мышечных колебаний между изометрически взаимодействующими субъектами: экспериментальное исследование с использованием анализа когерентности вейвлетов механомиографических и механотендографических сигналов. Sci. Реп. 8 , 15456. https://doi.org/10.1038/s41598-018-33579-5 (2018).
ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
52.
Маколи, Дж. Х. Физиологический и патологический тремор и ритмический центральный моторный контроль. Мозг 123 , 1545–1567. https://doi.org/10.1093/brain/123.8.1545 (2000).
Артикул PubMed Google ученый
53.
Бек, Т. Применение механомиографии для исследования мышечной функции (Transworld Research Network, 2010). https://issuu.com/researchsignpost/docs/beck/63.
54.
Розенбаум, Д. А. Контроль моторики человека (Elsevier, 2010). https://doi.org/10.1016/B978-0-12-374226-1.X0001-0.
Книга Google ученый
55.
Galizia, C.G. & Lledo, P.-M. Нейронауки — от молекулы к поведению: университетский учебник (Springer, 2013).https://doi.org/10.1007/978-3-642-10769-6.
56.
Ротвелл, Дж. С. Контроль за добровольным движением людей (Aspen Publishers, 1987).
Книга Google ученый
57.
Альбус Дж. С. Теория функции мозжечка. Math. Biosci. 10 , 25–61. https://doi.org/10.1016/0025-5564(71)
-4 (1971).
Артикул Google ученый
58.
Эш, Дж. И Бушара, К. Оливо-мозжечковая система как нервные часы. В Neurobiology of Interval Timing Vol. 829 (ред. Merchant, H. & de Lafuente, V.) 155–165 (Springer, 2014).
Глава
Google ученый
59.
Lawrenson, C. et al. Тайна мозжечка: разгадки экспериментальных и клинических наблюдений. Атаксия мозжечка 5 , 8. https://doi.org/10.1186 / s40673-018-0087-9 (2018).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
60.
Шадмер Р., Смит М. А. и Кракауэр Дж. У. Коррекция ошибок, сенсорное прогнозирование и адаптация в управлении моторикой. Annu. Rev. Neurosci. 33 , 89–108. https://doi.org/10.1146/annurev-neuro-060909-153135 (2010).
CAS Статья PubMed Google ученый
61.
Иври, Р. Б. Изучение роли мозжечка в сенсорном ожидании и выборе времени: Комментарий к Теше и Карху. Hum. Brain Mapp. 9 , 115–118. https://doi.org/10.1002/(SICI)1097-0193(200003)9:3%3c115::AID-HBM1%3e3.0.CO;2-5 (2000).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
62.
Bengtsson, F., Ekerot, C.-F. & Jörntell, H. Анализ in vivo тормозных синаптических входов и отскоков в глубоких ядерных нейронах мозжечка. PLoS One 6 , e18822. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0018822 (2011).
ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
63.
Lang, E.J. et al. Роль оливоцеребеллярного пути в моторном обучении и моторном контроле. Документ о консенсусе. Мозжечок 16 , 230–252. https://doi.org/10.1007/s12311-016-0787-8 (2017).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
64.
Groenewegen, H. J. Базальные ганглии и моторный контроль. Neural Plast. 10 , 107–120. https://doi.org/10.1155/NP.2003.107 (2003 г.).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
65.
Йорнтелл, Х. Физиология мозжечка: связи между свойствами микросхем и сенсомоторными функциями: физиология мозжечка. J. Physiol. 595 , 11–27. https://doi.org/10.1113 / JP272769 (2017).
CAS Статья PubMed Google ученый
66.
Фогт, Б. А., Финч, Д. М. и Олсон, С. Р. Функциональная неоднородность в поясной коре головного мозга: передняя исполнительная и задняя оценочные области. Cereb. Cortex 2 , 435–443. https://doi.org/10.1093/cercor/2.6.435-a (1992).
CAS Статья PubMed Google ученый
67.
Дойя, К. Дополнительные роли базальных ганглиев и мозжечка в обучении и моторном контроле. Curr. Opin. Neurobiol. 10 , 732–739. https://doi.org/10.1016/S0959-4388(00)00153-7 (2000).
CAS Статья PubMed Google ученый
68.
Ву Т. и Халлетт М. Мозжечок при болезни Паркинсона. Мозг 136 , 696–709. https://doi.org/10.1093/brain/aws360 (2013).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
69.
Pelzer, E. A. et al. Сети мозжечка с базальными ганглиями: возможность отслеживания церебелло-паллидных и субталамо-мозжечковых проекций в человеческом мозге. евро. J. Neurosci. 38 , 3106–3114. https://doi.org/10.1111/ejn.12314 (2013).
Артикул PubMed Google ученый
70.
Герфен, К. Р. и Уилсон, К. Дж. Глава II Базальные ганглии. В Справочнике по химической нейроанатомии vol. 12 (ред. Свансон, Л. В., Бьёрклунд, А. и Хёкфельт, А.) 371–468 (Elsevier, 1996). https://doi.org/10.1016/S0924-8196(96)80004-2.
71.
Wise, S. P., Murray, E. A. и Gerfen, C. R. Система лобной коры и базальных ганглиев у приматов. Крит. Rev. Neurobiol. 10 , 317–356. https://doi.org/10.1615/CritRevNeurobiol.v10.i3-4.30 (1996).
CAS Статья PubMed Google ученый
72.
О’Халлоран, К. Дж., Кинселла, Г. Дж. И Стори, Э. Мозжечок и нейропсихологическое функционирование: критический обзор. J. Clin. Exp. Neuropsychol. 34 , 35–56. https://doi.org/10.1080/13803395.2011.614599 (2012).
Артикул PubMed Google ученый
73.
Schlerf, J.Э., Галеа, Дж. М., Бастиан, А. Дж. И Сельник, П. А. Динамическая модуляция возбудимости мозжечка для резкой, но не постепенной зрительно-моторной адаптации. J. Neurosci. 32 , 11610–11617. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.1609-12.2012 (2012).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
74.
Jueptner, M. et al. Значение сенсорной информации для контроля движений мозжечка. Neuroimage 5 , 41–48. https://doi.org/10.1006/nimg.1996.0249 (1997).
CAS Статья PubMed Google ученый
75.
Welsh, J. P., Lang, E. J., Suglhara, I. & Llinás, R. Динамическая организация моторного контроля в оливоцеребеллярной системе. Природа 374 , 453–457. https://doi.org/10.1038/374453a0 (1995).
ADS CAS Статья PubMed Google ученый
76.
Витек, Дж. Л., Эш, Дж., ДеЛонг, М. Р. и Александр, Г. Е. Физиологические свойства и соматотопическая организация моторного таламуса приматов. J. Neurophysiol. 71 , 1498–1513. https://doi.org/10.1152/jn.1994.71.4.1498 (1994).
CAS Статья PubMed Google ученый
77.
Шерман, С. Таламус. Scholarpedia 1 , 1583. https://doi.org/10.4249/scholarpedia.1583 (2006).
ADS Статья Google ученый
78.
Хабер, С. Н. и Кальцавара, Р. Интегративная сеть кортико-базальных ганглиев: роль таламуса. Brain Res. Бык. 78 , 69–74. https://doi.org/10.1016/j.brainresbull.2008.09.013 (2009).
Артикул PubMed Google ученый
79.
Зоммер М. А. Роль таламуса в моторном контроле. Curr. Opin. Neurobiol. 13 , 663–670. https://doi.org/10.1016/j.conb.2003.10.014 (2003).
CAS Статья PubMed Google ученый
80.
Фогт, Б. А., Нимчинский, Э. А., Фогт, Л. Дж. И Хоф, П. Р. Человеческая поясная корка: особенности поверхности, плоские карты и цитоархитектура. J. Comp. Neurol. 359 , 490–506. https://doi.org/10.1002/cne.9035 (1995).
CAS Статья PubMed Google ученый
81.
Прушинский, Дж. А. и Скотт, С. Х. Оптимальное управление с обратной связью и реакция на растяжение с длительным латентным периодом. Exp. Brain Res. 218 , 341–359. https://doi.org/10.1007/s00221-012-3041-8 (2012).
Артикул PubMed Google ученый
82.
Дикенсон, А. Х. Эдиториал I. Br. J. Anaesth. 88 , 755–757. https://doi.org/10.1093/bja/88.6.755 (2002).
CAS Статья PubMed Google ученый
83.
Bueti, D., Walsh, V., Frith, C. & Rees, G. Различные мозговые цепи лежат в основе моторных и перцептивных представлений временных интервалов. J. Cogn. Neurosci. 20 , 204–214. https://doi.org/10.1162/jocn.2008.20017 (2008).
Артикул PubMed Google ученый
84.
D’Angelo, E. Глава 6 — Физиология мозжечка. В Справочнике по клинической неврологии вып. 154 (ред. Манто, М.И Хейсман, Т.А.Г.М.) 85–108 (Elsevier, 2018). https://doi.org/10.1016/B978-0-444-63956-1.00006-0.
85.
Rao, S. M. et al. Распределенные нейронные системы, лежащие в основе определения времени движений. J. Neurosci. 17 , 5528–5535. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.17-14-05528.1997 (1997).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
86.
Ланг, Э.Дж., Сугихара, И., Уэлш, Дж. П. и Ллинас, Р. Паттерны спонтанной спайковой активности комплекса клеток Пуркинье у бодрствующих крыс. J. Neurosci. 19 , 2728–2739. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.19-07-02728.1999 (1999).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
87.
Мэннинг, К. Д., Толхерст, С. А. и Бава, П. Время проприоцептивной реакции и долголатентные рефлексы у людей. Exp. Brain Res. 221 , 155–166. https://doi.org/10.1007/s00221-012-3157-x (2012).
CAS Статья PubMed Google ученый
88.
Gross, J. et al. Нейронная основа прерывистого моторного контроля у людей. Proc. Natl. Акад. Sci. 99 , 2299–2302. https://doi.org/10.1073/pnas.032682099 (2002).
ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
89.
Бэйс, П. М. и Вольперт, Д. М. Вычислительные принципы сенсомоторного управления, которые минимизируют неопределенность и изменчивость: вычислительные принципы сенсомоторного управления. J. Physiol. 578 , 387–396. https://doi.org/10.1113/jphysiol.2006.120121 (2007).
CAS Статья PubMed Google ученый
90.
Johansson, R. S. Как соматосенсорная информация модифицирует захват? В Motor Control: Concepts and Issues (ed.Хамфри, Д. Р. и Фройнд, Х.-Дж.) 331–355 (Wiley, 1991).
91.
Тодоров Э. Принципы оптимальности в сенсомоторном управлении. Нат. Neurosci. 7 , 907–915. https://doi.org/10.1038/nn1309 (2004).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
92.
Иври Р. Б. Представление временной информации в восприятии и управлении моторикой. Curr. Opin.Neurobiol. 6 , 851–857. https://doi.org/10.1016/S0959-4388(96)80037-7 (1996).
CAS Статья PubMed Google ученый
93.
Льюис, П. А. и Миалл, Р. С. Паттерны активации мозга во время измерения суб- и сверхсекундных интервалов. Neuropsychologia 41 , 1583–1592. https://doi.org/10.1016/S0028-3932(03)00118-0 (2003).
CAS Статья PubMed Google ученый
94.
Фармер, С. Ф., Бремнер, Ф. Д., Халлидей, Д. М., Розенберг, Дж. Р. и Стивенс, Дж. А. Частотный состав общих синаптических входов в мотонейроны, изученный во время произвольного изометрического сокращения у человека. J. Physiol. 470 , 127–155. https://doi.org/10.1113/jphysiol.1993.sp019851 (1993).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
95.
Какуда, Н., Нагаока, М. и Вессберг, Дж.Распространенная модуляция пар моторных единиц при медленном движении запястья у человека. J. Physiol. 520 , 929–940. https://doi.org/10.1111/j.1469-7793.1999.00929.x (1999).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
96.
Semmler, J. G., Kornatz, K. W., Dinenno, D. V., Zhou, S. & Enoka, R. M. Синхронизация двигательных единиц усиливается во время медленных сокращений мышц кисти. J. Physiol. 545 , 681–695. https://doi.org/10.1113/jphysiol.2002.026948 (2002).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
97.
ТАСС, П. и др. Обнаружение фазовой синхронизации n: m по зашумленным данным: применение в магнитоэнцефалографии. Phys. Rev. Lett. 81 , 3291–3294. https://doi.org/10.1103/PhysRevLett.81.3291 (1998).
ADS CAS Статья Google ученый
98.
Raethjen, J. et al. Кортико-мышечная когерентность в диапазоне 6–15 Гц: участвует ли кора головного мозга в генерации физиологического тремора ?. Exp. Brain Res. 142 , 32–40. https://doi.org/10.1007/s00221-001-0914-7 (2002).
Артикул PubMed Google ученый
99.
Burkhardt, M. Aktivitäten des sensor-motorischen Kortex bei Patienten mit komplexem regionalen Schmerzsyndrom (CRPS) (Universität Tübingen, 2006).
Google ученый
100.
Паус, Т., Сипила, П. К. и Страфелла, А. П. Синхронизация нейрональной активности в первичной моторной коре человека посредством транскраниальной магнитной стимуляции: исследование ЭЭГ. J. Neurophysiol. 86 , 1983–1990. https://doi.org/10.1152/jn.2001.86.4.1983 (2001).
CAS Статья PubMed Google ученый
101.
Башар, Э. Обзор альфа-активности в интегративной функции мозга: фундаментальная физиология, сенсорное кодирование, познание и патология. Внутр. J. Psychophysiol. 86 , 1–24. https://doi.org/10.1016/j.ijpsycho.2012.07.002 (2012).
Артикул PubMed Google ученый
102.
Энген Т. Восприятие запахов (Academic Press, 1982).
Google ученый
103.
Гиббонс, Б. Интимное обоняние. Natl. Геогр. 170 , 324–361 (1987).
Google ученый
104.
Holstege, G. Глава 14 Нисходящие двигательные пути и спинномозговая двигательная система: лимбические и нефимбические компоненты. In Progress in Brain Research vol. 87 (изд. Holstege, G.) 307–421 (Elsevier, 1991). https://doi.org/10.1016/S0079-6123(08)63057-5.
105.
Могенсон, Г., Джонс, Д. и Йим, К. От мотивации к действию: функциональный интерфейс между лимбической системой и двигательной системой. Прог. Neurobiol. 14 , 69–97. https://doi.org/10.1016/0301-0082(80)
-0 (1980).
CAS Статья PubMed Google ученый
106.
Анджелини К. и Сицилиано Г. Нервно-мышечные заболевания и Covid-19: советы научных обществ и первые наблюдения в Италии. евро.J. Transl. Myol. 30 , 9032. https://doi.org/10.4081/ejtm.2019.9032 (2020).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
107.
Hickie, I. et al. Постинфекционные синдромы и синдромы хронической усталости, вызванные вирусными и невирусными патогенами: проспективное когортное исследование. BMJ 333 , 575. https://doi.org/10.1136/bmj.38933.585764.AE (2006).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
108.
Накул, Л. С., Муди, К., Кингдон, К. С., Кларк, Т. Г. и Ласерда, Е. М. Сила захвата руки как клинический биомаркер ME / CFS и тяжести заболевания. Фронт. Neurol. 9 , 992. https://doi.org/10.3389/fneur.2018.00992 (2018).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
109.
Пьетранджело, Т., Фулл, С., Кошиа, Ф., Джильотти, П. В. и Фано-Иллич, Г. Старые мышцы в молодом теле: афоризм, описывающий синдром хронической усталости. евро. J. Transl. Myol. 28 , 7688. https://doi.org/10.4081/ejtm.2018.7688 (2018).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
110.
Dalise, S., Tropea, P., Galli, L., Sbrana, A. & Chisari, C. Нарушение функции мышц у онкологических больных на стадии до кахексии. евро. J. Transl. Myol. 30 , 8931. https://doi.org/10.4081/ejtm.2019.8931 (2020).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
111.
Edmunds, K. J. et al. Количественная компьютерная томография и анализ изображений для расширенной оценки мышц. евро. J. Transl. Myol. https://doi.org/10.4081/ejtm.2016.6015 (2016).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
112.
Šarabon, N., Smajla, D., Kozinc, Ž & Kern, H. Силовые тренировки пожилых людей и их потенциал для улучшения ежедневных двигательных функций. евро. J. Transl. Myol. 30 , 125–128. https://doi.org/10.4081/ejtm.2019.8898 (2020).
Артикул Google ученый
113.
Duyff, R. F. Нервно-мышечные данные при дисфункции щитовидной железы: проспективное клиническое и электродиагностическое исследование. J. Neurol. Нейрохирург. Психиатрия 68 , 750–755. https://doi.org/10.1136/jnnp.68.6.750 (2000).
CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый
114.
Хаджар, К. и Хагенакер, Т. Нервно-мышечное расстройство как начальное проявление вторичного гиперпаратиреоза — отчет о клиническом случае. евро. J. Transl. Myol. 27 , 6100. https://doi.org/10.4081/ejtm.2017.6100 (2017).
Артикул PubMed PubMed Central Google ученый
115.
Уотсон, Н. Ф., Бухвальд, Д., Голдберг, Дж., Нунан, С. и Элленбоген, Р. Г. Неврологические признаки и симптомы фибромиалгии. Arthritis Rheumatol. 60 , 2839–2844. https://doi.org/10.1002/art.24772 (2009 г.).
Артикул Google ученый
BERGHAHN BOOKS: контраст: хорватское кино сегодня
Хорватское кино сегодня
Отредактировано Аидой Видан и Горданой П. Црнкович

Издано Хорватской ассоциацией кино совместно с Berghahn Books
264 с., 136 ил., Библиог., индекс
ISBN 978-0-85745-894-0 34,95 долл. США / 27,95 фунтов стерлингов / Pb / Опубликовано (сентябрь 2012 г.)

Pb Просмотр корзины Ваша страна: Россия — редактировать Рекомендовать в вашу библиотеку Доступно в GOBI®
Обзоры
«… основательный обзор хорватского кинопроизводства, его особенностей в связи с его прошлой связью с югославским кинематографом, а также его неопределенного будущего… полезный справочник, который может широко использоваться как специалистами, так и студентами, а также всеми, кто интересуется в истории хорватского кино.” · Славянский и восточноевропейский журнал
«В этой первой всеобъемлющей антологии профили основных фильмов и беседы с выдающимися режиссерами опираются на политическую историю этого увлекательного многонационального региона, но ни один фильм или режиссер не ограничивается ее давлением. Идеальный путеводитель по малоизвестному миру . » · Кэрил Эмерсон , Принстонский университет
«Сборник статей, интервью и обзоров, представленный здесь Аидой Видан и Горданой П.Црнкович предлагает отличное представление о современном кино в Хорватии … статьи охватывают широкий спектр средств массовой информации, от анимации до художественных и документальных фильмов, в то же время охватывая множество различных тем — гендер, национальная идентичность, индустрия. Раздел обзора, возможно, является одним из самых разнообразных как с точки зрения выбора авторов, так и с точки зрения фильмов, опубликованных на английском языке. Редакция энергично и смело справилась с трудностями и составила отличный сборник, который может стать учебником для преподавания хорватского кино.» · Биргит Боймерс , Бристольский университет
Описание
Сцена хорватского кино до сих пор оставалась в основном недоступной. В этом первом всеобъемлющем томе по этому предмету признанные ученые исследуют не только его недавнюю историю с момента создания хорватского государства, но также возвращаются к его развитию в югославский период. Знакомя читателей со сложными политическими и художественными обстоятельствами, авторы подходят к анимационным, документальным и художественным фильмам через вопросы стиля и видения, социальной активности, индустрии, национальной идентичности, пола, аудитории, а также внутреннего и международного приема.Глубинные интервью с некоторыми из самых известных хорватских режиссеров дают представление об их художественной практике, а также служат свидетельством из первых рук как о социалистической, так и о переходной культурной среде. Раздел обзора, охватывающий богатый выбор фильмов с широкой палитрой тем и стилей, представляет собой незаменимый путеводитель по малоизвестному миру.
Аида Видан — научный сотрудник собрания устной литературы Милмана Пэрри и преподаватель южнославянских языков и литературы в Гарвардском университете.Она является автором книги , вышитой золотом, украшенной жемчугом, , : традиционные баллады о боснийских женщинах (Коллекция Милмана Парри и издательство Гарвардского университета) и соавтором хорватских книг для начинающих и сербских для начинающих (книги Гиппокрена) .
Гордана П. Црнкович — адъюнкт-профессор славянской и сравнительной литературы в Вашингтонском университете, Сиэтл. Она является автором книг «Воображаемые диалоги: восточноевропейская литература в разговоре с американской и английской литературой» (издательство Северо-Западного университета) и «Постюгославская литература и кино: пожары, основания, процветание» (Континуум).
На контрасте: Тетрадь предметная для сочинений Проф-пресс На контрасте А5 48 листов

На контрасте — Westwing Интерьер & Дизайн

На контрасте

Letra de На контрасте de Alphavite feat. Майти Ди

На контрасте: Рики Мартин от скуки осветлил бороду

контраст_1 существительное — определение, изображения, произношение и примечания по использованию

Update in Contrast-Enhanced Ultrasound — FullText — Visceral Medicine 2020, Vol. 36, № 6

Абстрактные

Введение

Сонография B-Scan: основа CEUS

Таблица 1.

Как работает CEUS?

Рис. 1.

Очаговые поражения печени

Рис. 2.

Рис. 3.

Злокачественные опухоли печени

Метастазы в печени

Абсцессы и внутриполостные CEUS

Поджелудочная железа

Рис. 4.

Кишечник

Другие опухоли желудочно-кишечного тракта

Онкологические проблемы

Рис. 5.

Послеоперационные вопросы

Интраоперационная CEUS

Рис. 6.

CEUS при травме

Обсуждение

Заключение

Заявление об этике

Заявление о конфликте интересов

Источники финансирования

Вклад авторов

Список литературы

Автор Контакты

Подробности статьи / публикации

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Достижения в области контрастных агентов для контрастной магнитно-резонансной томографии

Ингибирование инфламмасомы NLRP3 ослабляет апоптоз при остром поражении почек, вызванном контрастированием, за счет активации HIF1A и BNIP3-опосредованной митофагии

Frontiers | AtOMA1 влияет на систему OXPHOS и рост растений в отличие от других недавно идентифицированных АТФ-независимых протеаз в митохондриях Arabidopsis

Введение

Материалы и методы

Растительный материал

Конструирование плазмиды для экспрессии в дрожжах, протопластах и ​​растениях

Выделение, трансфекция и конфокальная визуализация протопластов

Трансформация растений

Штаммы дрожжей, анализ трансформации и комплементации

Выделение митохондрий и хлоропластов

Фракционирование митохондрий

BN-PAGE и анализы активности в геле

SDS-PAGE и анализ иммуноблоттинга

Количественный анализ ПЦР в реальном времени

Анализ дыхания

Статистический анализ

Результаты

Митохондриальная локализация гомологов дрожжевых АТФ-независимых пептидаз Arabidopsis

Функциональная комплементация в дрожжевых мутантах

Выбор линий вставки Т-ДНК

Характеристика линий вставки Т-ДНК

Система окислительного фосфорилирования (OXPHOS) в митохондриях Arabidopsis, лишенных функциональных протеаз AtIMP1a, AtOMA1, AtOCT1 и AtICP55

Относительный транскрипт и содержание белка митохондриальных протеаз у исследованных мутантов

Обсуждение

Заключение

Регистрационный номер

Взносы авторов

Финансирование

Заявление о конфликте интересов

Дополнительные материалы

Сноски

Список литературы

Отвратительные запахи влияют на характеристики адаптивной силы в отличие от нейтральных и приятных запахов

BERGHAHN BOOKS: контраст: хорватское кино сегодня

Хорватское кино сегодня

Отредактировано Аидой Видан и Горданой П. Црнкович

Обзоры

Описание

Добавить комментарий Отменить ответ

Конструирование плазмиды для экспрессии в дрожжах, протопластах и растениях