Эма тест: Страница не найдена | Национальное общество детских гематологов и онкологов

Содержание

Цитометрический метод связывания эозин-5-малеимида в диагностике наследственного сфероцитоза Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

ГЕМАТОЛОГИЯ

15. De Latour R.P., Schrezenmeier H., Mary J.Y. et al. Stem cell transplantation for paroxysmal nocturnal haemoglobinuria: an ongoing joint study of the AAWP EBMT Group and the French Society of Haema-tology. In: 35-th Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation. Goteborg, Sweden; 2009: abstract 316.

16. Schrezenmeier H., Shubert J., Luzzatto L. et al. Effects of eculizum-ab therapy in patients with paroxysmal nocturnal haemoglobinuria (PNH) receiving concurrent immunosuppressive therapy for bone marrow insufficiency. Blood. 2009; 114: 3012.

17. Soliris Summary of Product Characteristics. Alexion Europe SAS. 2007.

18. Abdulkadyrov K.M. Clinical Hematology: Guidebook. [Kliniches-kaya gematologiya: Spravochnik]. St. Petersburg: Piter; 2006. (in Russian)

19. Idel’son L.I., Benisovich V.I., Savina L.S., Radzhivilovskaya E.G. Sucrose test for PNH diagnostics. Problemy gematologii i pereli-vaniya krovi. 1972; 17 (8): 55-7. (in Russian)

20. Rosse W.F. Dr Ham’s test revisited. Blood. 1991; 78 (3): 547-50.

21. Rosse W.F. Variations in the red cells in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Br. J. Haematol. 1973; 24 (3): 327-42.

22. Oelschlaegel U., Besson I., Arnoulet C., Sainty D., Nowak R., Naumann R. et al. A standardized flow cytometric method for screening paroxysmal nocturnal haemoglobinuria (PNH) measuring CD55 and CD59 expression on erythrocytes and granulocytes. Clin. Lab. Haematol. 2001; 23 (2): 81-90.

23. Sutherland D.R., Kuek N., Azcona-Olivera J., Anderson T. Acton E., Barth D. et al. Use of a FLAER-based WBC assay in the primary screening of PNH clones. Am. J. Clin. Pathol. 2009; 132: 564-72.

24. Diep D.B., Nelson K.L., Raja S.M., Pleshak E.N., Buckley J.T. Gly-cosylphosphatidylinositol anchors of membrane glycoproteins are binding determinants for the channel-forming toxin aerolysin. J. Biol. Chem. 1998; 273: 2355-60.

25. Hall S.E., Rosse W.F. The use of monoclonal antibodies and flow

cytometry in the diagnosis of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Blood. 1996; 87: 5332-40.

26. Diep D.B., Nelson K.L., Raja S.M., Pleshak E.N., Buckley J.T. Gly-cosylphosphatidylinositol anchors of membrane glycoproteins are binding determinants for the channel-forming toxin aerolysin. J. Biol. Chem. 1998; 273: 2355-60.

27. Sutherland D.R., Kuek N., Davidson J., Barth D., Chang H., Yeo E. et al. Diagnosing PNH with FLAER and multiparameter flow cytometry. Cytometry B. Clin. Cytom. 2007; 72B (3): 167-77.

28. Brodsky R.A., Mukhina G.L., Li S. Nelson K.L., Chiurazzi P.L., Buckley J.T. et al. Improved detection and characterization of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria using fluorescent aerolysin. Am. J. Clin. Pathol. 2000; 114: 459-66.

29. Madkaikar M., Gupta M., Jijina F., Ghosh K. Paroxysmal nocturnal haemoglobinuria: diagnostic tests, advantages, & limitations. Eur. J. Haematol. 2009; 83 (6): 503-11.

30. Marinov I., Kohoutova M., Tkacova V., Pesek A., Cermak J., Cetko-vsky P. Clinical relevance of CD157 for rapid and cost-effective simultaneous evaluation of PNH granulocytes and monocytes by flow cytometry. Int. J. Lab. Hematol. 2015; 37 (2): 231-7.

31. Sutherland D.R., Acton E., Keeney M., Davis B.H., Illingworth A. Use of CD157 in FLAER-based assays for high-sensitivity PNH granulocyte and PNH monocyte detection. Cytometry B. Clin. Cytom. 2014; 86 (1): 44-55.

32. Ware R.E., Rosse W.F., Hall S.E. Immunophenotypic analysis of reticulocytes in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Blood. 1995; 86 (4): 1586-9.

33. Tsagarakis N.J., Paterakis G. A simple flow cytometric assay for routine paroxysmal nocturnal hemoglobinuria testing based on immature reticulocytes and granulocytes. Cytometry B. Clin. Cytom. 2012; 82 (4): 259-63.

© коллектив авторов, 2016

УДК 616.155.1-055.5/.7-076.5

Кузьминова Ж.А.1, Плясунова С.А.1, Жогов Б.Б.1, Сметанина Н.С.1 2

ЦИТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД СВЯЗЫВАНИЯ ЭОЗИН-5-МАЛЕИМИДА В ДИАГНОСТИКЕ НАСЛЕДСТВЕННОГО СФЕРОЦИТОЗА

Федеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева Минздрава России, 117997, г. Москва, Российская Федерация; 2Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова Минздрава России, 117997, г. Москва, Российская Федерация

Лабораторная диагностика наследственного сфероцитоза (НС) основывается на обнаружении в периферической крови сфероцитов, снижении индекса сферичности (ИС), снижении осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ). Основываясь на молекулярном дефекте, разработан новый тест диагностики НС на основе связывания внеклеточных фрагментов белка полосы 3 с эозин-5-малеимидом (ЭМА-тест). Целью нашей работы было провести сравнительный анализ чувствительности и специфичности методов, используемых для диагностики НС. Было проанализировано 94 пациента с различными формами анемий. Всем пациентам проведено комплексное клинико-лабораторное обследование, включавшее в том числе исследование ОРЭ, эритроцитометрию и ЭМА-тест как специфические методы диагностики НС. Снижение значения ЭМА-теста было выявлено у 51 (54%) из 94 больных, из них 47 с подтвержденным диагнозом НС. Нормальные значения ЭМА-теста обнаружены в 43 (46%) случаях, из них в 12 — с установленным диагнозом НС. Таким образом, чувствительность ЭМА-теста составила 79%%, специфичность — 80%. Наиболее чувствительными методами диагностики остаются ОРЭ (91%) и ИС (до 96%). Но самая высокая специфичность у ЭМА-теста (80%). В настоящее время ни один из используемых методов диагностики НС не может быть использован как универсальный. Для корректной диагностики заболевания необходимо проведение комплексного обследования.

Ключевые слова: наследственный сфероцитоз; ЭМА-тест; лабораторная диагностика; чувствительность; специфичность.

Для цитирования: КузьминоваЖ.А., Плясунова С.А., Жогов В.В., СметанинаН.С. Цитометрический метод связывания эозин-5-малеимида в диагностике наследственного сфероцитоза. Клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61 (3): 168-172.

DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-3-168-172.

Для корреспонденции: Кузьминова Жанна Андреевна, науч. сотр. отд. оптимизации лечения гематологических заболеваний ФГБУ ФНКЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева Минздрава России, E-mail: [email protected]

RUSSIAN CLINICAL LABORATORY DIAGNOSTICS. 2016; 61(3) DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-3-168-172

HEMATOLOGY

Kuzminova J.A.’, PlyasunovaS.A.’, Jogov V.V.1, SmetaninaN.S.12

THE CYTOMETRIC TECHNIQUE OF BINDING OF EOSIN-5-MALEIMIDE IN DIAGNOSTIC OF INHERENT SPHEROCYTOSIS

1The Dmitrii Rogatchev Federal research clinical center of children hematology, oncology and immunology of Minzdrav of Russia, 117997 Moscow, Russia; 2The N.I. Pirogov Russian national research medical university Minzdrav of Russia, 117997 Moscow, Russia

The laboratory diagnostic of inherent spherocytosis is based on detection of spherocytes in peripheral blood, decreasing of index of sphericity, decreasing of osmotic resistance of erythrocytes. The new test of diagnostic of hereditary spherocytosis build on molecular defect was developed on the basis of binding extracellular fragments of protein of band 3 with eosin-5-maleimide (EMA-test). The study was carried out to implement comparative analysis of sensitivity and specificity of techniques applied to diagnose inherent spherocytosis. The sampling of 94 patients with various forms of anemias was analyzed. All patients were applied complex clinical laboratory examination including analysis of osmotic resistance of erythrocytes, erythrocytometry and EMA-test as specific techniques of diagnostic of inherent spherocytosis. In 51 out of 94 patients (54%) decreasing of values of EMA-test was detected and in 47 patients diagnosis of inherent spherocytosis was confirmed. The standard values of EMA-test were established in 43 patients (46%) and 12 patients out of them with established diagnosis of inherent spherocytosis. Therefore, sensitivity of EMA-test made up to 79%% and specificity — 80%. The most sensitive techniques of diagnostic remain osmotic resistance of erythrocytes (91%) and index of sphericity (up to 96%). But the highest specificity in this respect has EMA-test (80%). Nowadays, none of implemented techniques of diagnostic of inherent spherocytosis can be applied as a universal one. The implementation of complex examination is needed for proper diagnostic of disease.

Keywords: inherent spherocytosis; EMA-test; laboratory diagnostic; sensitivity; specificity.

For citation: Kuzminova J.A., Plyasunova S.A., Jogov V.V., Smetanina N.S. The cytometric technique of binding of eosin-5-maleimide in diagnostic of hereditary spherocytosis. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics) 2016; 61 (3): 168-172. (in Russ.)

DOI: 10.18821/0869-2084-2016-61-3-168-172.

For correspondence: Kuzminova J.A., research assistant of department of optimization of treatment of hematologic

diseases. e-mail: [email protected]

Conflict of interests. The authors declare absence of conflict of interests.

Financing. The study had no sponsor support

Received 30.11.2015 Accepted 15.12.2015

Наследственный сфероцитоз (НС) является самой распространенной формой наследственной гемолитической анемии в мире. Частота встречаемости НС составляет 2,2 случая на 10 тыс. населения [1].

В патогенезе заболевания лежит аномалия мембраны эритроцита вследствие количественного или качественного дефицита мембранных белков. Молекулярный дефект при данном заболевании высокогетерогенный. По данным литературы, наиболее часто встречается дефицит белка полосы 3 (54% случаев) и спектрина (31%) [2]. Клинические проявления заболевания очень варьируют от бессимптомного носи-тельства до тяжелых, трансфузионно зависимых форм.

Диагностика НС в настоящее время основывается как на лабораторных данных, так и на клиническом обследовании и анамнестических данных (наследственность). В лабораторной диагностике характерным для НС считается наличие анемии различной степени тяжести, повышения средней концентрации гемоглобина в эритроците (МСНС), ретикуло-цитоза, гипербилирубинемии за счет непрямой фракции, обнаружение в периферической крови сфероцитов, снижение индекса сферичности (ИС), снижение осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ).

В лабораторной диагностике НС золотым стандартом считается снижение ОРЭ до и после инкубации эритроцитов в течение 24 ч при температуре 370С. Но данный метод исследования не является специфичным для НС, и показатели могут быть в пределах нормальных значений примерно в 10-20% случаев НС. Результаты исследования ОРЭ также не позволяют дифференцировать НС от других состояний, сопровождающихся появлением сфероцитов в периферической крови, в частности аутоиммунного гемолиза.

В 2000 г был предложен новый скрининговый тест, который проводится методом проточной цитометрии — тест

связывания поверхностных фрагментов белка полосы 3 мембраны эритроцитов с флуоресцентным красителем эозин-5-малеимид (ЭМА) ЭМА-тест). Суть метода состоит во взаимодействии красителя ЭМА непосредственно с лизином в 430-м положении внеклеточной петли белка полосы 3. N-концевой цитоплазматический участок белка полосы 3 взаимодействует с анкирином и белком полосы 4.2, который в свою очередь соединяется со спектриновым цитоскелетом, обеспечивая дополнительную стабильность билипидной мембране эритроцита. Отсутствие или снижение экспрессии любого из белков мембраны эритроцита приводит к нарушению стабильности цитоскелета клетки и снижению экспрессии белка полосы 3 на поверхности мембраны эритроцита. В результате снижается связывание ЭМА с белком полосы 3 и соответственно происходит снижение активности флуоресценции. Белок полосы 3 составляет около 25% всех белков на поверхности мембраны эритроцита, что обусловливает доминирующую связь ЭМА с данным белком по сравнению с другими ЭМА-связывающимися белками (Rh-белок, Rh-гликопротеин и CD47).

Представленные в 2000 г. данные М. King и соавт. [3] свидетельствовали о высокой чувствительности (92,7%) и специфичности (99,1%) данного метода, что позволило авторам рекомендовать его в качестве основного метода для диагностики НС.

Цель настоящей работы — провести сравнительный анализ чувствительности и специфичности методов, используемых в РФ для диагностики НС в настоящее время.

Материал и методы. Нами проанализированы результаты обследования 94 пациентов с анемиями различного гене-за, проходивших обследование в ФНКЦ «ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России в 2013-2015 гг (медиана возраста 6 лет, от 2 мес до 17 лет; 54 мальчика и 40 девочек).

ГЕМАТОЛОГИЯ

Таблица 1

Характеристика пациентов

Нозология Возраст Соотношение по количеству мальчики:девочки

НС (n = 59) медиана 6,5 года (от 5 мес до 17 лет) 27:32 (1:1,2)

НО (n = 3) медиана 7,6 года (от 3 до 16 лет) 3:0

НСт (n = 1) 2 года 1:0

Бета-талассемия, малая форма (n = 8) медиана 7 лет (от 2 мес до 17 лет) 7:1

Альфа-талассемия с минимальными изменениями (n = 1) 2 года 1:0

ВДА (n = 2) 1 год 1:1

АИГА (n = 5) медиана 4 года(от 2 до 10 лет) 3:2 (1,5:1)

ВСА (n = 1) 13 лет 1:0

ЖДА (n = 4) медиана 12 лет (от 4 до 16 лет) 4:0

Гемолитическая анемия вследствие носительства нестабильного гемоглобина (Нв Köln) (n = 1) 4 года 1:0

Гемолитическая анемия вследствие снижения активности Г-6-ФД (n = 2) медиана 7 лет (от 3 до 11 лет) 2:0

Неуточненная гемолитическая анемия (n = 7) медиана 7 лет (от 3 до 14 лет) 3:4 (1:1,3)

Распределение по полу, возрасту и нозологии представлено в табл. 1. В исследование было включено 59 пациентов с НС, 28 пациентов с другими формами анемий (из них 8 пациентов с малой формой бета-талассемии, 1 пациент с альфа-талассемией, 3 пациента с наследственным овалоцитозом (НО), 1 пациент с наследственным стоматоцитозом (НСт), 2 пациента с врожденной дизэритропоэтической анемией (ВДА), 2 пациента с гемолитической анемией вследствие недостаточной активности Г-6-ФД (Г6ФД), 1 пациент с гемолитической анемией вследствие нестабильного гемоглобина, 1 пациент с врожденной сидеробластной анемией (ВСА), 5 пациентов с аутоиммунной гемолитической анемией (АИГА), 4 пациента с железодефицитной анемией (ЖДА) и 7 пациентов с неуточненной формой гемолитической анемии.

Всем пациентам было проведено комплексное клинико-лабораторное обследование, включавшее общий анализ крови, выполненный на автоматическом гематологическом анализаторе (XT-4000i, XE-2100, Sysmex, Япония), биохимический анализ крови с обязательным определением фракций билирубина, активности ЛДГ, обмена железа (ARCHITECT c4000, Abbott, США; Cobas C311, Roche, Швейцария), ОРЭ до и после инкубации по унифицированному методу в модификации Идельсона и эритроцитометрия с расчетом среднего диаметра эритроцитов, индекса сферичности (ИС) (нормальные значения 3,4-3,9) и индекса овалоцитоза (ИО) [4]. В случае подозрения на гемоглобинопатию проводилось исследование фракций гемоглобина методом капиллярного электрофореза (Capillarys-2 Flex Piercing, Sebia, Франция) и последующим молекулярно-биологическим исследованием глобиновых генов (выделение из лейкоцитов периферической крови или отдельных колоний гемопоэтических клеток с использованием коммерческого набора «АмплиПрайм ДНК-

сорб-В» согласно инструкции производителя, определение первичной нуклеотидной последовательности гена HBB выполнено методом прямого секвенирования с использованием капиллярного секвенатора ABI 3130XL Genetic Analyser, Applied Biosystems, поиск наиболее частых делеций c вовлечением генов альфа-глобинов выполнялся методом ПЦР с анализом продуктов после электрофореза в агарозном геле). При необходимости выполнялось исследование активности (Г6ФД) эритроцитов спектрофотометрическим методом с использованием набора реактивов RANDOX (Великобритания), прямая проба Кумбса — общепринятым методом с использованием моноклональных сывороток.

Для проведения ЭМА-теста взятие периферической крови проводилось в вакуумные пробирки с этилендиаметинте-трауксусной кислотой (К2ЭДТА). Подготовка образцов крови к исследованию включала отмывку эритроцитов в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) при рН 7,0 при 1000 об/мин, инкубирование с красителем ЭМА при комнатной температуре в течение 60 мин и отмывка от несвязавшегося красителя в ФСБ. При проведении теста определяется среднее значение флуоресценции эритроцитов по каналу FL1 (488 нм) у 5 доноров, вычисляется среднее значение из этих 5 и затем сопоставляется со средним значением флуоресценции исследуемых образцов. Коэффициент равен значению флуоресценции исследуемого образца, разделенному на среднее значение флуоресценции 5 доноров, нормальные значения составляют от 0,8 до 1. Исследование проводилось на проточном цитометре Navws (Beckman Coulter, США). Анализ полученных данных проведен с использованием программы Kaluza analysis.

Результаты и обсуждение. Результаты исследования показателей, используемых в стандартной диагностике НС для всех групп пациентов представлены в табл. 2 и 3. Значимых различий в средних показателях среднего объема эритроцитов (MCV), коэффициента распределения эритроцитов по объему (RDW) и количества ретикулоцитов у пациентов с НС и другими гемолитическими анемиями не выявлено. Однако стоит отметить, что у пациентов с ЖДА и талассеми-ей MCV статистически достоверно ниже, чем у пациентов с НС и другими анемиями. Среднее содержание гемоглобина в эритроците (MCH) и MCHC оказались выше у пациентов с НС, чем при других анемиях. В группе пациентов с другими анемиями McH достоверно ниже оказался при ЖДА и талассемии.

По данным эритроцитометрии, средний диаметр эритроцита и ИС у пациентов с НС оказался значимо ниже (6,28±0,041 и 2,47±0,05 мкм соответственно, р = 0,000 и р = 0,000), чем у пациентов с другими формами анемий. Результаты расчета ИС в различных группах пациентов представлены на рис. 1. В группе больных НС 54 (91,5%) человека

Таблица 2

Результаты исследования

Показатель НС Другие анемии Р

MCV, фл 78,56±0,8372 74,91±3,054 0,161

MCH, пг 28,46±0,2898 25,33±1,055 0,000

MCHC, г/л 362,5±2,41 337,6±4,662 0,000

RDW, % 19,03±0,4853 17,63±0,8277 0,122

ИС 2,469±0,05259 3,64±0,1102 0,000

Средний диаметр 6,275±0,04135 6,937±0,05502 0,000

эритроцита, мкм

Ретикулоциты, % 5,953±0,4455 4,493±1,118 0,162

RussIAN CLINICAL LABORATORY DIAGNOsTICs. 2016; 61(3) DOI 10.18821/0869-2084-2016-61-3-168-172

HEMATOLOGY

1,2 -,

1 —

0,8 —

® 0,6 -es

0,4 -0,2 —

О

Таблица 3

Значения эритроцитарных индексов в зависимости от нозологии

в |

о ♦ $ о о ♦ Нозология MCV, фл MCH, пг MCHC, г/л RDW, %

о : ♦ НС 78,56±0,83 28,46±0,28 362,5±2,41 19,03±0,48

НО 78,97±6,92 27,3±2,63 343,7±16,83 20,6±5,27

о ♦ ♦ НСт 93 31,1 334 12,2

о АИГА 96,04±22,42 31,3±2,28 330±11,48 18,1±2,28

Талассе- 56,51±4,83 19,14±0,8 343,7±5,49 18,6±0,98

мия

Г-6-ФД 97±0,84 32,25±0,65 332,5±9,5 11,9±0,2

ЖДА 61,15±7,2 19,35±1,96 314±14,32 19,65±0,86

ВСА 50,3 13 258 31,8

4 5 6 7 Диагноз 8 9 10 11 12 ♦ ЭМА-тест ВДА Нв Köln Неуточненная 81,35±2,61 86,5 80,7±5,72 28,05±0,72 26,1 29,26±0,86 345±7 301 362,7±5,76 17,2±0,29 16,1 14,33±0,93

анемиями.

1 — НС; 2 — талассемия; 3 — ЖДА; 4 — АИГА; 5 — НО; 6 — НСт; 7 — анемия неуточненная; 8 — ВДА; 9 — ВСА; 10 — Г-6-ФД; 11 — Hb Köln. Диапазон нормальных значений 3,4-3,9.

имели значение ИС менее 3 (от 0,9 до 2,9). 3 (5,1%) больных продемонстрировали ИС в диапазоне 3-3,4, в так называемой серой зоне, и 2 (3,4%) пациента — более 3,4. Следует отметить, что низкое значение ИС (< 3) было обнаружено и у 3 из 5 пациентов с АИГА (60%), в оставшихся двух случаях ИС составил 3 и 3,5. В случае ЖДА, ВСА и талассемии ИС всегда был выше 3,4. Если рассматривать группу пациентов с неуточненной гемолитической анемией, то оказалось что значения ИС в четырех случаях из семи (57% больных) были выше 3,4, а в оставшихся трех случаях (43% больных) — в диапазоне 3,0-3,4. Интересно отметить, что пациенты с Г-6-ФД, ВДА, НО, НСт и гемолитической анемией вследствие

6 5,5 5 4,5 4 3,5 3 2,5 2 1,5 1

0,5 0

I $

♦ ♦

:

.! ♦

♦ ♦ ♦

О 1

4 5 6 7 8 9 10 11 12 Диагноз

♦ ИС

Рис. 2. Результаты ЭМА-теста у пациентов с различными анемиями.

1 — НС; 2 — талассемия; 3 — ЖДА; 4 — АИГА; 5 — НО; 6 — НСт; 7 — анемия неуточненная; 8 — ВДА; 9 — ВСА; 10 — Г-6-ФД; 11 — Hb Köln. Диапазон нормальных значений 0,8-1,0.

нестабильного гемоглобина продемонстрировали ИС в диапазоне «серой зоны».

Проанализировано также возможное сочетание показателей ИС, находящихся в «серой зоне», со значениями ЭМА-теста. Всего пациентов, имеющих значение ИС в «серой зоне», 14, из них 85,7% (12 пациентов) имели нормальные показатели ЭМА-теста и у 14,3% (2 пациента) ЭМА-тест оказался сниженным (1 пациент с носительством нестабильного гемоглобина, 1 пациент с НСт) (рис. 2).

Обнаружение сфероцитов в мазке периферической крови показало значительную разницу между пациентами с НС и другими формами анемий (табл. 4). Сфероциты были обнаружены у 64 пациентов, из них у 55 (93,22%) пациентов с НС и у 8 (28,57%) пациентов с другими анемиями.

Снижение ОРЭ до и после инкубации обнаружено у 54 пациентов с НС, что составляет 91,5% от всех пациентов с НС. Интересно, что у 2 пациентов с легким течением НС ОРЭ до инкубации была нормальной, а после инкубации -сниженной. И у 2 пациентов также с легким течением НС, наоборот, до инкубации были сниженные показатели, а после инкубации — в норме.

Снижение ОРЭ было выявлено и у 14 (40%) пациентов с другими анемиями, при этом у 14 пациентов снижение вы-

Таблица 4

Среднее содержание сфероцитов в мазке периферической крови в зависимости от нозологии

Нозология Сфероциты, % Погрешность

НС (n = 59) 14,87 ±13,5

НО (n = 3) 0,43 ±0,66

НСт (n = 1) 0,1

АИГА (n = 5) 0,98 ±0,99

Талассемия (n = 9) 3,733 ±9,53

Г-6-ФД (n = 2) 0,2 ±0,14

ЖДА (n = 4) 0,05 ±0,057

ВСА (n = 1) 8,8

ВДА (n = 2) 0,95 ±0,21

Hb Köln (n = 1) 1

Неуточненная анемия (n = 7) 0,68 ±0,9

ГЕМАТОЛОГИЯ

Таблица 5

Чувствительность и специфичность диагностических методов в группе больных НС

Показатель Общее количество пациентов/количество пациентов, имеющих положительный результат Чув-стви-тель-ность, % Специ-фич- ность, %

ЭМА-тест 59/47 79 80

ОРЭ до инкубации 59/54 91 60

ОРЭ после инкубации 59/54 91 71

Средний диаметр эритроцита 59/53 89 71

ИС 59/57 96 57

Сфероциты в мазке 59/55 93 74

явлено до инкубации и только у 10 (28,5%) из них после инкубации.

Снижение значения ЭМА-теста было выявлено в 51 случае (54% больных), из них 47 — с подтвержденным диагнозом НС, 1 — с НСт, 2 — с АИГА, 1 — с гемолитический анемией вследствие носительства нестабильного гемоглобина (Hb Köln).

Нормальные значения ЭМА-теста обнаружены в 43 (46%) случаях, из них в 12 с установленным диагнозом НС.

Полученные результаты специфичности и чувствительности анализируемых методов диагностики представлены в табл. 5. ЭМА-тест, несмотря на заявленные характеристики, показал не самые высокие показатели чувствительности (79%) и специфичности (80%). Наши данные оказались значительно ниже описанных в работах М. King и соавт. [3].

Наиболее чувствительными методами, по нашим данным, остаются ОРЭ (чувствительность 91%) и эритроцитометрия (чувствительность до 96%). Но хотелось бы отметить, что полученные нами данные свидетельствуют о самой высокой специфичности все-таки у ЭМА-теста (80%) в отличие от других методов диагностики. Специфичность ОРЭ составила 60% (до инкубации) и 71% (после инкубации). В зависимости от показателей (обнаружение сфероцитов, диаметр эритроцита, ИС) эритроцитометрия показала результаты специфичности от 54 до 74%.

Среди ложноположительных результатов снижение ЭМА-теста в части случаев АИГА с тепловыми агглютининами (2 пациента в нашем исследовании) можно объяснить за счет присоединения антител класса IgG к внеклеточным фрагментам белка полосы 3 с последующим их удалением макрофагами [5], что сопровождалось и обнаружением сфероцитов в периферической крови больных и низкими значениями ИС и измененной ОРЭ.

Следует отметить, что ни у одного пациента с ЖДА или талассемией не было выявлено снижения ЭМА-теста.

Заключение. Полученные результаты согласуются с ранее опубликованными данными, демонстрирующими отсутствие 100% чувствительности и специфичности для всех используемых в настоящее время методов лабораторной диагностики НС.

Целесообразно использовать комплекс клинико-лабораторных исследований для корректной диагностики различных форм гемолитической анемии.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Исследование не имело спонсорской поддержки.

ЛИТЕРАТУРА (пп. 2-3, 5-6, 8-9, 11 см. REFERENCES)

1. Кувшинников В.А., Захаревич В.И. Диагностика и современные подходы к лечению наследственной сфероцитарной анемии Миньковского-Шоффара у детей. Медицинский журнал. 2013; (4): 17-21.

4. Байдун Л.В., Сметанина Н.С., Соколинский Б.З., Плясунова С.А., Кашпор С.А., Парпара А.А. и др. Автоматическая эритроцитометрия в роботизированном микроскопе Мекос-Ц1. Клиническая лабораторная диагностика. 2003; (6): 39-42.

7. Зенина М.Н., Козлов А.В., Бессмельцев С.С., Котова Т.Н. Мор-фометрический анализ в диагностике врожденных микросферо-цитозов. Medline.ru. 2011; 12: 448-57. Available at: http://www. medline.ru/public/art/tom12/art37.html 10. Прохорова Ю.А., Соколова Н.Е., Зуева Е.Е. Ранняя диагностика наследственного сфероцитоза как профилактика деформации лицевого скелета. Клинико-лабораторный консилиум. 2012; 41 (1): 40-6.

Поступила 30.11.15

REFERENCES

1. Kuvshinnikov V.A., Zakharevich V.I. Diagnostics and modern approaches to treatment of hereditary spherocytosis Minkowsky-Shauffard disease in children.Meditsinskiy zhurnal. 2013; (4): 17-21 (in Russian)

2. Bianchi P. Current diagnostic approach and screening methods for hereditary spherocytosis. Thalassemia Reports. 2013; 3 (s1):e32: 78-80.

3. King M.J., Behrens J., Rogers C., Flynn C., Greenwood D., Chambers K. Rapid flow cytometric test for the diagnosis of membrane cytoskeleton-associated hemolytic anaemia. Br. J. Haematol. 2000; 111 (3): 924-33.

4. Baydun L.V., Smetanina N.S., Sokolinskiy B.Z., Plyasunova S.A., Kashpor S.A., Parpara A.A. et al. Automatic red blood cell mor-pholpgy in robotized microscope MECOS-C1. Klinicheskaya labo-ratornaya diagnostika. 2003; (6): 39-42. (in Russian)

5. Marcus N., Attias D., Tamary H. Autoimmune hemolytic anemia: current understanding of pathophysiology. Hematology Education: the education program for the annual congress of the European Hematology Association. 2014; 8: 331-8.

6. El Gendy W.M., Hasaab H.M., Ghanem A.M., Lewis I.M., Nawar S.M. The application of eosin maleimide-binding test in the diagnosis of hereditary spherocytosis among undiagnosed cases of chronic hemolytic anemia in children. Egypt. J. Haematol. 2014; 39: 109-13.

7. Zenina M.N., Kozlov A.V., Bessmel’tsev S.S., Kotova T.N. Morpho-metric analysis in the diagnosis of hereditary microspherocytosis. Medline.ru. 2011; 12: 448-57. Available at: http://www.medline.ru/ public/art/tom12/art37.html (in Russian)

8. Bianchi P., Fermo E., Vercellati C., Marcello A.P., Porreti L., Cor-telezzi A. et al. Diagnostic power of laboratory tests for hereditary spherocytosis: a comparison study in 150 patients grouped according to molecular and clinical characteristics. Haematologica. 2012; 97 (4): 516-23.

9. Tachavanich K., Tanphaichitr V.S., Utto W., Viprakasit V. Rapid Flow cytometric test using eosin-5-maleimide for diagnosis of red blood cell membrane disorders. Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 2009; 40 (3): 570-5.

10. Prokhorova Yu.A., Sokolova N.E., Zueva E.E. Early diagnosis of hereditary spherocytosis as the prevention of deformation of the facial skeleton. Kliniko-laboratornyy konsilium. 2012; 41 (1): 40-6. (in Russian)

11. King M.J., Telfer P., Mackinnon H., Langabeer L., McMahon C., Darbyshire P. et al. Using the eosin-5-maleimide binding test in the differential diagnosis of hereditary spherocytosis and hereditary pyropoikilocytosis. Cytometry B Clin. Cytom. 2008; 74 (4): 244-50.

ВЫЯВЛЕНИЕ И ВЕРИФИКАЦИЯ НАСЛЕДСТВЕННОГО СФЕРОЦИТОЗА СРЕДСТВАМИ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ | Прохорова

1. Рукавицын О. А., Павлов А. Д. Анемии. Под ред. О. А. Рукавицына, А. Д. Павлова. СПб.: Детство-Пресс. 2011. С. 67–68.

2. Mullier F., Lainey E., Fenneteua O., Da Costa L., Schillinger F., Bailly N., Cornet Y., Chatelian C., Dogne J.-M., Chatelian B. Additional erythrocytic and reticulocytic parameters helpful for diagnosis of hereditary spherocytosis: results of a multicentre study. Annals of hematology. July 2011; 90: 759–768.

3. Гусева С. А., Вознюк В. П., Дубкова А. Г. Анемии: принципы диагностики и лечения. Под ред. С. А. Гусевой. Киев. 1999. С. 74–75.

4. Fourcade Ch., Jary L., Belaouni H. Reticulocyte Analisys Provided by the Coulter GEN S significance and interpretation in regenerative and nonregenerative hematologic conditions. Laboratory hematology. 1999; 5: I–xx.

5. Cniron M., Cynober T., Mielot F., Тchernia G., Croisille L. The GENs: a fortuitous finding of a routine screening test for hereditary spherocytosis. Hematol Cell Ther. 1999; 41: 113–116.

6. Agre P., Orringer E. P., Bennett V. Deficient red-cell spectrin in severe, recessivelly inherited spherocytosis. N Engl J Med. 1982; 306: 1155–61.

7. King M. J., Zanella A. Hereditary red cell membrane disorders and laboratory diagnostic testing. Int J Lab Hematol. 2013 Jun; 35 (3): 237–43.

8. Girodon F., Garcon L., Bergion E., Largier M., Delaunay J., Feneant-Thibault M., Maynadie M., Couillaud G., Moreira S., Cynober T. Usefulnes of the eosin-5 maleimide cytometric method as a first-line screening test for the diagnosis of hereditary spherocytosis: Comparison with ektacytometry and electrophoresis. Br J Haematol. 2008; 140: 468–70.

9. Kar R., Mishra P., Pati H. P. Evalution of eosin-5-maleimide flow cytometric test in diagnosis of hereditary spherocytosis. Int Jnl Lab Hem. 2010; 32: 8–16.

10. Прохорова Ю. А., Зуева Е. Е., Соколова Н. Е. Применение метода проточной цитометрии в диагностике наследственного сфероцитоза (тест на связывание эозин-5 малеимида). Клиническая лабораторная диагностика. 2012; 7: 31–5.

11. Doherty G. J., McMahon H. T. Mediation, modulation and consequences of membrane-cytoskeleton interactions. Annual Review of Biophisics. 2008; 37: 73.

12. King M. J., Jepson M. A., Guest A., Mushens R. Detection of hereditary pyropoikilocytosis by the eosin-5 maleimide (EMA)-binding test is attributable to a marked reduction in EMA-reactive transmembrane proteins. Int. Journal of laboratory Hematology. 2011; 33: 205–211.

13. Kedar P. S., Colah R. B., Kulkarni S., Ghosh K., Mohanty D. Expirience with eosin-5-maleimide as a diagnostic tool for red cell membrane cytoskeleton disorders. Clin Lab Haematol. 2003; 25: 373–6.

14. Назаренко Г. И., Кишкун А. А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. Москва: Изд.: Медицина. 2005. С. 39–41.

15. Баранов А. А., Семикина Е. Л., Мельничук О. С., Гордеева О. Б., Намазова-Баранова Л. С., Морозова Н. А., Кожевникова О. В., Геворкян А. К., Маянский Н. А. Показатели ретикулоцитарных индексов у здоровых детей. Вопросы диагностики в педиатрии. 2010; 4 (2): 19–21.

16. Lazarova E., Pradier O., Cotton F., Gulbis B. Automated reticulocytes parameters for hereditary spherocytosis screening. Ann Hematol. 2014 Jun; 10: 58–69.

17. Broseus J., Visomblain B., Guy J., Maynadie M., Girodon F. Evaluation of mean sphere cospuscular volume for predicting hereditary spherocytosis. Int J Lab Hem. 2010; 32 (5): 521–522.

Антитела к эндомизию суммарные IgA + IgG (Anti-Endomisial Antibody IgA&IgG, EMA)

Метод определения Непрямая иммунофлюоресценция (с использованием срезов гладкомышечной ткани примата).

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация Один из наиболее специфичных и чувствительных серологических тестов, использующихся в диагностике целиакии. См. также тесты: Антиглиадиновые антитела (№№ 270, 271) и Антитела к ретикулину (№ 971). Эндомизий – рыхлая соединительная ткань, окружающая гладкомышечные клетки. У генетически предрасположенных людей употребление глютена (белка клейковины хлебных злаков) может вызвать развитие иммуноопосредованного воспалительного заболевания кишечника (целиакии, или глютен-чувствительной энтеропатии), характеризующейся появлением аутоиммунных антител к структурам внеклеточного матрикса, в т. ч. эндомизию и ретикулину. Важным фактором развития такого аутоиммунного ответа является тканевая трансглютаминаза (фермент, участвующий в метаболизме глютена, по всей видимости, являющийся основной антигенной мишенью антител к эндомизию и ретикулину, выявляемых в исследованиях на тканевых препаратах). Серологическое тестирование (в том числе — исследование крови на наличие антител к эндомизию, глиадину – см. тесты №№  270, 271, ретикулину – см. тест № 971) полезно в качестве предварительного скринингового обследования при клинических подозрениях на целиакию и решении вопроса о направлении на биопсию с гистологическим исследованием, что является решающим диагностическим тестом. Комбинация тестов повышает специфичность и чувствительность серологического исследования (тест на антитела к глиадину более чувствителен, тесты на антитела к эндомизиуму и ретикулину – более специфичны). Возможен следующий алгоритм серологического исследования при подозрении на целиакию: при выявлении антител к глиадину подтвердить результат исследованием антител к эндомизию и ретикулину. При выборе единственного теста, предпочтительным является исследование антител к эндомизию. Тестирование детей до 2 лет менее информативно, поскольку антитела, характерные для целиакии, могут у них еще не развиться. Исследование антител, ассоциированных с целиакией, используют также в мониторинге лечения целиакии (исключение глютена из пищи). Обычно антитела к эндомизию, глиадину, ретикулину исчезают через несколько месяцев после перехода на безглютеновую диету.

Антитела к эндомизию, IgA (Anti-Endomysial Antibodies, EMA, IgA)

Метод определения Непрямая иммунофлюоресценция.

Исследуемый материал Сыворотка крови

Доступен выезд на дом

Онлайн-регистрация Антитела к эндомизию были описаны в 1983 году и с тех пор широко используются в диагностике целиакии. Эндомизий представляет собой соединительную ткань, окружающую мышечные клетки. В поперечнополосатой мускулатуре эндомизиальные волокна тонкие, в то время как в гладкой мускулатуре эндомизий составляет опорную основу (строму) мышечных слоев. Доказано, что основным антигеном антител к эндомизию является тканевая трансглутаминаза. Тканевая трансглутаминаза — многофункциональный белок, представленный в разных тканях, который локализуется в различных компартментах клеток, а также на клеточной поверхности и внеклеточном матриксе и катализирует деамидирование, трансамидирование и образование перекрестных связей белков. В соединительной ткани тканевая трансглутаминаза участвует в ферментативной модификации ее основных белков — коллагена и эластина, что приводит к укреплению структуры соединительной ткани. По имеющимся представлениям, устойчивые к перевариванию пептидные фрагменты глиадина (компонент глютена) проходят через барьер кишечного эпителия посредством внутриклеточного переноса или через межклеточные контакты при повышенной кишечной проницаемости. Действие тканевой трансглутаминазы стенок кишечника приводит к деамидированию пептидных фрагментов глиадина, что увеличивает их иммуногенность. В комплексе с тканевой трансглутаминазой они вызывают у лиц с генетической предрасположенностью образование антител как к тканевой трансглутаминазе (№1282, №1283), так и к глиадину (№270, №271). Исследование антител к эндомизию класса IgA обладает чувствительностью около 95% и специфичностью более 98% в ранней диагностике целиакии. Метод непрямой иммунофлюоресценции с использованием нативных антигенов для выявления антител к эндомизию хорошо стандартизирован, что позволяет использовать его в качестве референсного теста для подтверждения выявления антител другими методами (European Society of Pediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition, ESPGHAN, 2012). Выявление как антител к эндомизию класса IgA, так и антител к тканевой трансглутаминазе классов IgA и IgG, указывает на высокую вероятность целиакии. Низкоположительный уровень антител к тканевой трансглутаминазе можно наблюдать при ряде аутоиммунных заболеваний, инфекциях, опухолях, псориазе, повреждении миокарда, заболеваниях печени. В этих случаях антитела к эндомизию обычно не выявляются, что позволяет использовать антитела к эндомизию в качестве лучшего серологического метода подтверждения диагноза целиакии. Чувствительность выявления аутоантител может быть несколько ниже у детей до 2 лет в связи с низкой выработкой иммуноглобулина IgA, а также у лиц с селективным IgA дефицитом и у обследуемых, получающих иммуносупрессивную терапию. При низкой концентрации IgA сыворотки крови (менее 0,2 г/л) (тест № 45) обследование должно включать, по крайней мере, один тест для выявления специфических аутоантител класса IgG, например, антитела к деамидированным пептидам глиадина класса IgG (см.№ 270). При интерпретации отрицательных результатов исследования необходимо принимать во внимание предшествующую диету, поскольку титры антител к эндомизию и других серологических маркеров целиакии падают ниже порога детекции через полгода после перехода на безглютеновую диету. Контроль уровня антител через 12 месяцев можно использовать для оценки соблюдения диеты.

Антитела класса IgA к эндомизию (S-EMA IgA)

Определение EMA IgA  является одним из исследований в диагностику целиакии и герпетиформного дерматита.  Тканевая трансглутаминаза является основным антигеном для антител к эндомизию при целиакии.. Антигены для антител к эндомизию присутствуют в пищеводе, пуповине, желудке, печени и др. тканях человека и приматов. Эти ткани можно использовать в качестве антигенного субстрата при проведении флуоресцентного иммунологического анализа.

Целиакия – аутоиммунное заболевание слизистой оболочки тонкой кишки с генетической предрасположенностью, характеризующиеся атрофией ворсинок слизистой оболочки с синдромом мальабсорбции.

Присутствие генов HLA-DQ2 и HLA-DQ8 увеличивает риск заболевания целиакией, поскольку антигенпрезентирующие рецепторы, кодируемые данными генами, связываются с глиадином значительно сильнее, чем остальные изоформы рецептора. В результате возникает атрофия ворсинок в стенке тонкой кишки, которая, в свою очередь, вызывает нарушения всасывания питательных веществ (витаминов и минералов) и  синдром мальабсорбции. Типичные симптомы целиакии – хроническая диарея, вздутие живота, похудение и задержка ростаКлинически целиакия может проявиться в любом возрасте, но чаще  это происходит в возрасте от 6 месяцев до 2 лет или между 20-40 годами жизни. Женщины заболевают в 2-3 раза чаще, чем мужчины.Показания к назначению теста:

  • Подозрение на целиакию.  > 90% нелеченных/не соблюдавших безглютеновую диету больных имеют положительные результаты теста на антитела
    • периодический понос, чередующийся с запорами 
    • потеря веса 
    • замедление роста у детей или вздутие живота 
    • остеопороз 
    • железодефицитная анемия 
    • Дефицит фолиевой кислоты – структурные дефекты и повреждение эмали на постоянных зубах
  • Наблюдение за пациентом, соблюдающим безглютеновую диету 
  • Подозрение на герпетиформный дерматит ( результат положительный у 90% больных)

Метод анализа:

реакция  непрямой иммунофлюоресценции (нРИФ)

Pеференсные значения смотритe в таблице

Интерпретация:

При увеличенных значениях антител класса  IgА к эндомизию и тканевой трансглютаминазе необходима консультация гастроэнтеролога или педиатра и биопсия тонкой кишки. Согласно последним указаниям по диагностике  целиакии (European Society for Gastroenterology, Hepatology and Nutrition-ESPGHAN, 2011)  в ряде случаев  возможно оказаться отказаться от биопсии тонкой кишки для подтверждения диагноза, если ребенок имеет выраженные клинические симптомы, высокие значения tTG IgA и EMA IgA и является носителем HLA-DQ2/DQ8. Определение  EMA IgA антитела подходят для диагностирования целиакии у детей старше 2-х лет и взрослых . Для диагностирования целиакии.  у детей младше 2-х лет чувствительность антител  EMA IgA низкаяи следует предпочесть определение антител класса  IgA и класса IgG  к дезамидированному глиадину (S-AGA IgA, чувствительность около 98-100%) и IgG антитела (S-AGA IgG, чувствительность 96-100%). . При подозрении на целиакию в случае  отрицательного результата теста на EMA IgA и  TtG IgA  следует определить  концентрацию сывороточного  иммуноглобулина А (S-IgA). У пациентов с заране е известным дефицитом IgA для диагностирования заболевания и мониторинга следует определять наличие антител класса IgG: S- tTG IgG, S-EMA IgG или S- AGA IgG, поскольку у этих пациентов не синтезируются аутоантитела изотипа IgA.

Если результаты тестов  оказались отрицательными, но подозрение на целиакию сохраняется, исследование необходимо повторить через 3-6 месяцев.

Концентрация EMA IgA, S-tTG IgA или S-AGA IgA (также антитела изотипа IgG)  снижается в сыворотке крови при соблюдении безглютеновой диеты по прошествии 2-3 месяцев,  при прекращении/нарушении  диеты концентрация антител снова возрастает. Ложноположительный результат возможен при  болезни Крона, мальабсорбции, возникшей на фоне хронической инфекции, при непереносимости белка ( яйцо, молоко). Ложноположительный результат возможен в редких случаях и у здоровых людей.

Эмболизация маточных артерий (ЭМА) при миоме матки


Эмболизация маточных артерий — это малоинвазивное вмешательство, в ходе которого через прокол артерии на бедре в сосуды, питающие миому, вводятся частички специального медицинского пластика — поливинилалкоголя (ПВА), полностью прекращающие в них кровоток. Используемый эмболизационный препарат абсолютно безопасен, биологически инертен и не может вызывать аллергических реакций. Кроме того, для ЭМА необходимо мизерное количество препатата, как правило, не более 500 мг.

На сосуды здорового миометрия эмболизация не оказывает практически никакого воздействия, что связано с особенностями их строения (кровоснабжение узлов осуществляется из так называемого перифиброидного сплетения — сосудистой сети, окружающей миому по периферии) и техникой самого вмешательства. После прекращения кровоснабжения мышечные клетки, формирующие миому, гибнут. В течение нескольких недель происходит их замещение соединительной тканью (фиброз), которое приводит к значительному уменьшению или исчезновению миомы и ее проявлений. Таким образом, вскоре после ЭМА миомы как таковой уже не остается — остается лишь соединительная ткань на ее месте. Затем в процессе «рассасывания» этой ткани происходит значительное уменьшение и/или полное исчезновение узлов, а симптомы миомы проходят.

В большинстве случаев (порядка 98%) после эмболизаций никакого дополнительного лечения по поводу миомы матки уже не требуется.

Плюсы и минусы ЭМА

  • ЭМА — малоинвазивный и довольно безопасный метод лечения, не требующий наркоза.
  • Вмешательство высокоэффективно и вероятность рецидива миомы минимальна.
  • Происходит немедленное улучшение симптоматики.
  • Не требуется длительного пребывания в больнице.
  • Низкая вероятность осложнений. Матка не удаляется.
  • Сохраняется способность к деторождению.

Подготовка к ЭМА

Как правило, эмболизация выполняется в день госпитализации. В этот день рекомендуется воздержаться от завтрака, как и перед любым хирургическим вмешательством. В ходе процедуры выполняется прокол артерии в верхней части правого бедра, поэтому необходимо заранее побрить бедро и пах справа. Перед процедурой назначается укол успокоительного препарата. На обе ноги врач наложит эластичные бинты. После процедуры эластичные бинты потребуется носить в течение 5-7 дней. Затем в сопровождении гинеколога пациент направляется в отделение рентгенохирургии пешком или на каталке.

Процедура ЭМА

Эмболизация маточных артерий выполняется в специально оборудованной рентгенооперационной. Эта операционная оснащена ангиографическим аппаратом, позволяющим хирургу в рентгеновском режиме контролировать манипуляции внутри кровеносных сосудов. Эмболизацию выполняют рентгенэндоваскулярные хирурги — это специалисты, обладающие высокой квалификацией сосудистых хирургов и большим опытом работы со сложной ангиографической аппаратурой.

Перед началом операции эндоваскулярный хирург задает пациентке несколько вопросов (об индивидуальной переносимости лекарственных препаратов и т.п.). Пациентка укладывается на специальный ангиографический стол. В вену на внутренней стороне руки устанавливается тонкий катетер для капельницы и введения лекарств. Перед началом процедуры эндоваскулярный хирург обработает правое бедро и живот специальным антисептиком и накроет стерильными простынями. Далее проводится местная анестезия раствором новокаина или лидокаина для безболезненной пункции правой общей бедренной артерии. Через небольшой (1,5 мм) прокол кожи в верхней части бедра в артерию вводится тонкий катетер (1,2 мм), который под контролем рентгенотелевидения проводится непосредственно в маточные артерии.

Затем, так же под контролем рентгеноскопии, через катетер вводятся крошечные частички эмболизационного препарата, которые перекрывают сосуды, питающие миому. Эмболизационные частицы, как правило, вводятся поочередно и в правую и в левую маточные артерии.

Длительность процедуры ЭМА от 10 минут до 2,5 часов в зависимости от варианта отхождения маточной артерии и опыта хирурга. Но как правило, ее продолжительность не превышает 20 минут.

Пункция артерии, благодаря обезболиванию, не вызывает практически никаких ощущений. В процессе выполнения процедуры ЭМА возможно периодическое появление чувства тепла, легкого жжения в нижних отделах живота, пояснице — это действие контрастного вещества, которое вводит хирург для визуализации сосудов.

После окончания эмболизации врач удаляет катетер из бедренной артерии и в течение 15-25 минут давит пальцами на место пункции, чтобы избежать образования синяка (гематомы). Затем на правое бедро накладывается давящая повязка. С этого момента в течение 10-12 часов нельзя сгибать правую ногу. Давящую повязку снимают уже через 2-3 часа.

После ЭМА (постэмболизационный период)

После эмболизации Вас на каталке отвозят обратно в палату. На место пункции на один час наложат лед. Возможно, на несколько часов будет установлена капельница. Через 1-2 часа после процедуры возникают довольно сильные тянущие боли в нижних отделах живота. Эти ощущения являются следствием ишемии (голодания) клеток миомы. Болезненные ощущения продолжаются несколько часов и адекватно купируются обезболивающими препаратами.

Помимо этого, в первые дни после ЭМА может повыситься температура до субфибрильных цифр — 37-37,5. Возможна слабость, недомогание, тошнота. Тем не менее, все эти симптомы, известные как постэмболизационный синдром, быстро проходят, не представляют угрозу для здоровья и не относятся к осложнениям ЭМА.

Обычно эти симптомы проходят уже на следующий день. Как правило, через 1-3 дня после ЭМА пациенты выписываются домой. Еще 7-10 дней после этого рекомендуется избегать физической активности. Выписка возможна уже на следующий день после процедуры.

Результаты эмболизации маточных артерий

Наиболее активно уменьшение миомы продолжается в первые 6 месяцев после ЭМА, но и в дальнейшем сохраняется динамика к уменьшению. В среднем к 1 году после ЭМА миомы уменьшаются в 4 раза. У 99% пациентов нормализуются менструации, уменьшается объем менструальных кровотечений. Симптомы сдавления уменьшаются и исчезают у 92-97% больных вскоре после процедуры ЭМА.

Отсутствие риска рецидива заболевания после вмешательства является важной особенностью ЭМА. Это связано с тем, что при ЭМА воздействие происходит на все узлы, независимо от их размера. В целом, более чем у 98% пациентов после ЭМА не требуется дополнительное лечение миомы матки, даже в отдаленном периоде.

Побочные эффекты и осложнения эмболизации маточных артерий

Довольно часто после ЭМА образуются гематомы (синяка) на бедре в месте пункции артерии. Это осложнение обычно не требует дополнительного лечения и проходит в течение 1-2 недель.

Не более, чем у 3% пациенток в первые 3-6 месяцев после эмболизации миомы матки возможно нарушение регулярности менструального цикла или транзиторная (временная) аменорея.

ЭМА и беременность

Эмболизация не лишает женщин способности к деторождению. Очевидно, что после гистерэктомии о деторождении речь не идет, однако даже после миомэктомии часто возникает бесплодие, связанное с образованием спаек в матке и вокруг неё. Поэтому ЭМА — метод выбора для женщин с миомой, планирующих беременность.

Вынашивать беременность после эмболизации маточных артерий можно, но риск прерывания беременности в этом случае очень большой на любом сроке. И во время родов, в послеродовом периоде это определенные осложнения.

Не рекомендуется планирование беременности после проведения эмболизации в течении года, так как идет уменьшение узлов и сокращение матки, а значит высокий риск выкидыша.


(PDF) Clinical and laboratory profile of hereditary spherocytosis

ОБЗОРЫ

Том 11  № 1  2019 Вестник Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова

71

University Press; 2005. P. 132-62. https://doi.org/10.1017/

CBO9780511545306.

7.

Мицура Е.Ф. Наследственный сфероцитоз у детей:

современные представления (обзор литературы) //

Проблемы здоровья и экологии. – 2011. – Т. 28. –

№ 2. – С. 39–44. [Mitsura EF. Hereditary spherocytosis in

children: modern conception (literature review). Problemy

zdorovya i ekologii. 2011;28(2):39-44. (In Russ.)]

8.

Bolton-Maggs PH, Langer JC, Iolascon A, et al. Guidelines

for the diagnosis and management of hereditary spherocy-

tosis. Br J Haematol. 2011;156:37-49. https://doi.org/10.1

111/j.1365-2141.2011.08921.

9.

Gallagher PG. Abnormalities of the erythrocyte membrane.

Pediatr Clin North Am. 2013;60(6):1349-62. https://doi.

org/10.1016/j.pcl.2013.09.001.

10.

Anong WA, Franco T, Chu H, et al. Adducin forms

a bridge between the erythrocyte membrane and

its cytoskeleton and regulates membrane cohesion.

Blood. 2009;114:1904-1912. https://doi.org/10.1182/

blood-2009-02-203216.

11.

Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематоло-

гия. – М.: Медицина, 1970. [Kassirskiy IA, Alekseev GA.

Klinicheskaya gematologiya. Moscow: Meditsina; 1970.

(In Russ.)]

12.

Safeukui I, Buffet PA, Deplaine G, et al. Quantitative as-

sessment of sensing and sequestration of spherocytic ery-

throcytes by the human spleen. Blood. 2012;120:424-30.

https://doi.org/10.1182/blood-2012-01-404103.

13.

Mariani M, Barcellini W, Vercellati C, et al. Clinical and

hematologic features of 300 patients affected by hereditary

spherocytosis grouped according to the type of the mem-

brane protein defect. Haematologica. 2008;93(9):1310-7.

https://doi.org/10.3324/haematol.12546.

14.

Eber S, Lux SE. Hereditary spherocytosis — defects in pro-

teins that connect the membrane skeleton to the lipid bi-

layer. Semin Hematol. 2004;41:118-41.

15.

Кувшинников В.А., Захаревич В.И. Диагностика

и современные подходы к лечению наследственной

сфероцитарной гемолитической анемии Минков-

ского – Шоффара у детей // Медицинский журнал. –

2013. – № 4. – С. 17–21. [Kuvshinnikov VA, Zakhare-

vich VI. diagnostics and modern approaches to the treat-

ment hereditary spherocytosis in children. Medical Jour-

nal. 2013;(4):17-21. (In Russ.)]

16.

Луговская С.А, Почтарь М.Е. Гематологический

атлас . – М.: Триада, 2004. [Lugovskaya SA, Pochtar’ ME.

Gematologicheskiy atlas. Moscow: Triada; 2004. (In Russ).]

17.

Tamary H, Aviner S, Freud E, et al. High incidence of early

cholelithiasis detected by ultrasonography in children and

young adults with hereditary spherocytosis. J Pediatr He-

matol Oncol. 2003;25:952-954. https://doi.org/10.1007/

s12288-014-0379-z.

18.

Delhommeau F, Cynober T, Schischmanoff PO, et al. Na-

tural history of hereditary spherocytosis during the first

year of life. Blood. 2000;95:393-7.

19.

Christensen RD, Henry E. Hereditary spherocytosis in neo-

nates with hyperbilirubinemia. Pediatrics. 2010;125:120-5.

https://doi.org/10.1542/peds.2009-0864

20.

Delaunay J, Nouyrigat V, Proust A, et al. Different impacts

of alleles alphaLEPRA and alphaLELY as assessed versus

a novel, virtually null allele of the SPTA1 gene in trans.

Br J Haematol. 2004;127:118-22. https://doi.org/10.1182/

blood-2005-05-1813.

21.

Ribeiro ML, Alloisio N, Almeida H, et al. Severe hereditary

spherocytosis and distal renal tubular acidosis associated

with the total absence of band 3. Blood. 2000;96:1602-4.

22.

Rocha S, Costa E, Catarino C, et al. Erythropoietin levels

in the different clinical forms of hereditary spherocytosis.

Br J Haematol. 2005;131:534-42. https://doi.org/10.1111/

j.1365-2141.2005.05802.x.

23.

Lee JH, Moon KR. Coexistence of gilbert syndrome and he-

reditary spherocytosis in a child presenting with extreme jaun-

dice. Pediatr Gastroenterol Hepatol Nutr. 2014;17(4):266-269.

https://doi.org/10.3350/kjhep.2010.16.3.321.

24.

Rawa K, Adamowicz-Salach A, Matysiak M, et al. Coexi-

stence of Gilbert syndrome with hereditary haemolytic

anaemias. J Clin Pathol. 2012;65. https://doi.org/10.1136/

jclinpath-2011-200580(7):663- 665.

25.

Prabhakar S, Kedar Roshan B, Colah Kanjaksha Ghosh

Dipika Mohanty. Hereditary spherocytosis in association

with severe G6PD deficiency: report of an unusual case.

Clinica Chimica Acta. 2004;344(1-2):221-224. https://doi.

org/10.1016/j.cccn.2004.02.021.

26.

Brugnara C, Mohandas N. Red cell indices in classifica-

tion and treatment of anemias: from M.M. Wintrobes’s

original 1934 classification to the third millennium. Curr

Opin Hematol. 2013; 20:222-30. https://doi.org/10.1097/

MOH.0b013e32835f5933.

27.

Kutter D, Coulon N, Stirn F, et al. Demonstration and

quantification of “hyperchromic” erythrocytes by haema-

tological analysers. Clin Lab. 2002;48:163-170.

28.

Urrechaga E, Borque L, Escanero JF. The role of auto-

mated measurement of RBC subpopulations in diffe-

rential diagnosis of microcytic anemia and β-thalassemia

screening. Am J Clin Pathol. 2011;135:374-379. https://

doi.org/10.1309/AJCPJRh2I0XTNFGA.

29.

Eberle SE, Sciuccati G, Bonduel M, et al. Erythrocyte in-

dexes in hereditary spherocytosis. Medicina (B Aires).

2007;67:698-700. (In Spanish).

30.

Rocha S, Costa E, Rocha-Pereira P, et al. Complementary

markers for the clinical severity classification of heredi-

tary spherocytosis in unsplenectomized patients. Blood

Cells Mol Dis. 2011;46:166-70. https://doi.org/10.1016/j.

bcmd.2010.11.001.

31.

Зенина М.Н., Козлов А.В., Бессмельцев С.С., Котова Т.Н.

Морфометрический анализ в диагностике врожденных

микросфероцитозов // www.medline.ru. – 2011. – Т. 12.

[Zenina MN, Kozlov AV, Bessmeltsev SS, Kotova TN. mor-

phometric analysis in the diagnosis of congenital micro-

spherocytosis. www.medline.ru. 2011;12. (In Russ.)]

Анти-эндомизиальные антитела (EMA) | Больницы Саут-Тис NHS Foundation Trust

Альтернативное название:
Описание: IgA антиэндомизиальные антитела остаются наиболее специфическим тестом на целиакию или герпетиформный дерматит. Антитела IgA к tTg такие же, как и большинство антиэндомизиальных антител IgA. Они более чувствительны, но немного менее специфичны, чем антиэндомизиальные антитела. Поскольку анти-tTg можно легко автоматизировать, этот тест используется в качестве скринингового теста.Все сыворотки, положительные на IgA анти-tTg-антитела, анализируются на IgA-антиэндомизиальные антитела. Оба анализа намного более чувствительны и специфичны, чем тесты на антитела к глиадину, которые использовались раньше. Эндомизий — это термин, используемый для обозначения соединительной ткани, окружающей гладкие мышечные пучки многих тканей. Антиэндомизиальные антитела (направленные против неколлагеновых белков внеклеточного матрикса, вырабатываемых фибробластами) выявляются с использованием ткани пищевода обезьяны. Антигены образуются под действием тканевой трансглутаминазы, которая превращает остатки глутамина в белках в глутаминовую кислоту.Тот же процесс происходит с пшеничным глютеном и объясняет связь между антителами к глютену и аутоантителами кишечника.
Индикация: Подтверждающий тест на целиакию, герпетиформный дерматит.
См. Также глютеновый экран.
Устный перевод: IgA антиэндомизиальные антитела обнаруживаются у 90% пациентов с глютеновой болезнью. Они являются очень специфическим и чувствительным маркером целиакии и герпетиформного дерматита. Предполагается, что тест на антиэндомизиальные антитела имеет 98% чувствительность и 98% специфичность для клинической или субклинической целиакии.Поскольку глютеновая болезнь обычно связана с дефицитом IgA, необходимо проявлять осторожность при диагностике этих пациентов, поскольку очевидно, что они не экспрессируют антитела IgA. Будут исследованы антиэндомизиальные антитела IgG.
Образец: Пробирка сепаратора сыворотки (SST)
Детали анализа: Непрямая иммунофлуоресценция с использованием пищевода обезьяны.
Ограничения: Как правило, выполняется только при положительном значении антител к тканевой трансглутаминазе.
Эталонный диапазон: Отрицательный / положительный
Примечания к диапазону анализа: Результат отмечен как ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЙ / ОТРИЦАТЕЛЬНЫЙ
Срок выполнения: 5-7 дней
Аналитическая лаборатория: Иммунология JCUH

Endomysium antibody — обзор

Боль в животе при целиакии

Помимо диареи с нарушением всасывания, целиакия может проявляться различными желудочно-кишечными симптомами, включая боль в животе. 36 Однако у канадских и турецких детей с повторяющейся болью в животе распространенность антиэндомизиальных антител в качестве серологического маркера целиакии была слишком низкой (1,2% и 2,7%), чтобы рекомендовать скрининг на целиакию при повторяющейся боли в животе. 37, 38 Сообщалось, что у взрослых до 5% пациентов с синдромом раздраженного кишечника (СРК) страдали глютеновой болезнью; у большинства из них были положительные антиэндомизиальные антитела. 39

Эндоскопические признаки, такие как атрофия ворсинок, обычно наблюдаются в двенадцатиперстной и тощей кишке, но могут затрагивать весь тонкий кишечник.Подводная эндоскопия с высоким разрешением обеспечивает оптимальное изображение ворсинок. 40 Этот подводный вид присутствует большую часть времени во время VCE, что позволяет диагностировать атрофию ворсинок. О хорошей корреляции результатов VCE с гистологией сообщалось в небольшой серии исследований. 41 Таким образом, предположительный диагноз обширной целиакии с помощью VCE должен быть возможен у пациентов с хронической болью в животе. Изменения слизистой оболочки при менее обширной целиакии могут ограничиваться двенадцатиперстной кишкой.Эти изменения могут быть легко пропущены VCE. В исследовании Culliford et al., 42 , обсуждаемом ниже, у всех пациентов с подтвержденной целиакией и нормальными результатами в VCE были эндоскопические признаки целиакии, диагностированные при традиционной эндоскопии. Из-за риска отсутствия изменений слизистой оболочки, ограниченных двенадцатиперстной кишкой, невозможности получить гистологию, затрат и длительной оценки, VCE в настоящее время не является тестом первой линии при подозрении на глютеновую болезнь. Тесты на антиэндомизиальные или рекомбинантные антигенные антитела к тканевой трансглутаминазе (t-TG) представляют собой высокочувствительный и специфический неинвазивный диагностический инструмент по разумной цене.Следует избегать тестов на антитела к глиадину из-за низкой чувствительности и специфичности. Кажется маловероятным, что VCE предоставит диагноз целиакии у пациентов с нормальным стандартным обследованием, включая отрицательные Т-ТГ / эндомизиальные антитела, или даже после нормальной дуоденоскопии и нормальной биопсии двенадцатиперстной кишки, хотя данных пока нет.

Тем не менее, появляются новые доказательства потенциальной роли VCE в диагностике осложнений во время глютенового спру.Первоначальные сообщения продемонстрировали возможность VCE для выявления язвенного еюноилеита 43 и ассоциированной с энтеропатией Т-клеточной лимфомы. 44 В первом одноцентровом проспективном исследовании 47 пациентов с осложненным глютеновым спру, VCE выявила патологические находки в большом проценте. 42 Эта группа из Нью-Йорка обнаружила у 87% пациентов признаки глютеновой спру, такие как атрофия ворсинок, трещины и мозаичный узор. Эти изменения распространились на подвздошную кишку в 34%.Кроме того, у 52% подгруппы пациентов с болью в животе, несмотря на соблюдение безглютеновой диеты (n = 27), были обнаружены неожиданные результаты, преимущественно язвы. Также в одном случае были обнаружены стриктура и инвагинация, каждый с повторяющимися эпизодами боли в животе. Узелки в тонкой кишке наблюдались у 6 пациентов. У двоих из этих 6 пациентов была боль в животе. У обоих были изъязвленные узелки, а также аберрантный клон Т-клеток при биопсии двенадцатиперстной кишки, подозрительный на лимфому. Однако единственная аденокарцинома, обнаруженная в этом исследовании, была обнаружена у пациента со скрытым кровотечением.Следует отметить, что большинство пациентов в этом исследовании, включая пациента с карциномой, подвергались повторным безрезультатным радиологическим исследованиям, таким как КТ, последующее наблюдение тонкой кишки или энтероклиз.

Предварительные результаты европейского многоцентрового исследования аналогичны, демонстрируя изменения слизистых оболочек у 32 из 43 пациентов (74%) с продолжающимися симптомами при соблюдении безглютеновой диеты; Обнаружено по 2 стриктуры и опухоли (4,6%). 45

Пока нет рекомендаций по применению VCE для наблюдения за бессимптомными пациентами с глютеновой спру.Однако представляется целесообразным обследовать пациентов с рецидивирующими симптомами, несмотря на хорошее соблюдение диеты. По аналогии со сравнительными исследованиями скрытых желудочно-кишечных кровотечений и болезни Крона, VCE может поставить диагноз, несмотря на безрезультатные радиологические исследования у пациентов с осложненным глютеновым спрутом. VCE может заменить SBFT и энтероклиз при поиске новообразований у этих пациентов.

Результаты VCE при глютеновой болезни Признаками глютенового литника являются полная или частичная атрофия ворсинок, мозаичный рисунок слизистой оболочки, уменьшение и зубчатость складок (Рисунок 10.4а). Эти результаты потенциально обратимы при соблюдении безглютеновой диеты, но сохраняются у большого процента пациентов с текущими или повторяющимися симптомами. Небольшие эрозии наблюдаются у значительной части этих пациентов. Изъязвления, утолщенные складки (рис. 10.4b), новообразования или стеноз являются признаками осложнения и могут указывать на рефрактерный литниковый канал, язвенный тоино-илеит, Т-клеточную лимфому или аденокарциному, ассоциированную с энтеропатией.

Значение VCE при глютеновой болезни Тесты на антиэндомизиальные / t-TG антитела и эндоскопия верхних отделов желудочно-кишечного тракта с биопсией двенадцатиперстной кишки по-прежнему являются основой для поиска подозреваемой целиакии.Однако при наблюдении за пациентами с осложненным литниковым каналом VCE представляется наиболее чувствительным неинвазивным тестом.

[Проточный цитометрический тест с использованием мечения красной крови эозин-5′-малеимидом (EMA) для диагностики наследственного сфероцитоза]

Цель: Изучить чувствительность и специфичность анализа эозин-5′-малеимида (EMA) для диагностики наследственного сфероцитоза (HS) и проверить стабильность реагента и образцов.

Методы: Тест проточной цитометрии EMA, тест на осмотическую хрупкость NaCl и тест лизиса подкисленного глицерина были выполнены с использованием образцов периферической крови от 80 пациентов с HS и 44 пациентов с другими заболеваниями крови, были сравнены чувствительность и специфичность трех методов, а также осуществимость EMA тест связывания оценивался. Была протестирована стабильность реагента EMA и образцов HS, хранящихся при различных температурах.

Результаты: Среди 124 протестированных образцов чувствительность и специфичность теста связывания EMA составила 0,925 и 0,954, теста осмотической хрупкости NaCl — 0,950 и 0,455, а теста лизиса подкисленного глицерина — 1,000 и 0,318 соответственно. Хотя чувствительность теста на осмотическую хрупкость NaCl и теста лизиса подкисленного глицерина была немного выше, чем у теста связывания EMA, специфичность первых двух методов была низкой, они не могли четко определить, является ли сфероцитоз наследственным сфероцитозом.Результаты эксперимента показали, что EMA чувствителен к температуре и не должен храниться небольшими аликвотами при -80 ℃ в течение 6 месяцев. Стабильность образца HS была лучше, 6 дней хранения при 4 ℃ и 3 дня при комнатной температуре не повлияли на результаты.

Вывод: Тест связывания EMA с помощью проточной цитометрии показал хорошую чувствительность и специфичность для диагностики HS.EMA reagent should be stored at-80 ℃ and the HS samples should be tested within 6 days storage at 4 ℃ and 3 days at room temperature.

目的: 探讨伊红-5′-马来酰亚胺(EMA)为标记流式细胞术检测遗传性球形红细胞的灵敏性和特异性,并对试剂和样本稳定性进行验证。

方法: 对80例遗传性球形红细胞增多症(HS)和44例非HS患者外周血样本全部采用EMA标记流式细胞术检测、红细胞渗透脆性试验和酸化甘油溶解试验三种方法进行检测,比较三种方法的灵敏性和特异性,探讨EMA标记流式细胞术检测的可行性。并观察EMA及样本在不同储存条件下的稳定性。

结果: 通过检测124例样本得出,EMA标记流式细胞术检测的灵敏性和特异性分别为0.925和0.954,红细胞渗透脆性试验分别为0.950和0.455,酸化甘油溶解试验为1.000和0.318。红细胞渗透脆性试验和酸化甘油溶解试验的灵敏性稍高于EMA流式检测方法,但特异性差,不能明确区分球形红细胞增多是否为HS。EMA对温度很敏感,−80 °C储存180 d较4 °C存储1 d稳定。HS样本的稳定性较好,4 °C放置6 d、室温条件放置3 d不会影响结果的判定。

结论: EMA标记流式细胞术检测HS具有良好的灵敏性和特异性,−80 °C储存EMA较为稳定,须在样本4 °C放置6 d内、室温条件放置3 d内完成检测。

EMA, tTG Testing Have Limited Clinical Utility in Patients Already Diagnosed With Celiac Disease

While useful in screening for celiac disease in patients who still are consuming gluten, tests that measure serum endomysial antibodies (EMA) and antibodies to tissue transglutaminase (tTG) have low sensitivity in detecting persistent villous atrophy in patients with biopsy-confirmed celiac disease on gluten-free diets, a meta-analysis found (Gastroenterology 2017;153:689-701).

EMA IgA и tTG IgA были разработаны и утверждены в качестве скрининговых тестов; однако, в отсутствие других неинвазивных методов мониторинга здоровья слизистой оболочки кишечника, их использование для последнего «широко распространено и поддерживается несколькими обществами гастроэнтерологов», по словам авторов. Исследователи провели метаанализ, чтобы увидеть, какие доказательства существуют в пользу этой практики.

В обзоре литературы авторы нашли 26 исследований, которые соответствовали их критериям включения, в том числе шесть, 15 и пять, включающих тесты tTG IgA, тесты EMA IgA или оба теста tTG IgA и EMA IgA, соответственно.Поскольку многие из этих исследований не были разработаны для ответа на тот же вопрос, на который пытались ответить исследователи, они разработали шкалу оценки качества, основанную на четырех областях и девяти критериях, таких как время между биопсией и тестированием на антитела, а также отчеты пациентов о диетах. Они определили истинно положительные результаты как положительный тест на антитела и атрофию ворсинок по гистологической классификации Марша 3 — деструктивные поражения с плоской слизистой оболочкой. Истинно отрицательные имели отрицательный тест на антитела и неповрежденные ворсинки.

Оба анализа имели высокую специфичность у пациентов со стойкой атрофией ворсинок; тТГ IgA, 0.83 и EMA IgA, 0,91. Однако у них была низкая чувствительность для выявления пациентов с этим состоянием: 0,50 в случае tTG IgA и 0,45 для EMA IgA. Напротив, эти два теста обладают высокой чувствительностью и высокой специфичностью при нелеченой целиакии.

Результаты подчеркивают необходимость других «проверенных чувствительных мер, которые предсказывают восстановление слизистой оболочки», по словам авторов. «В отсутствие неинвазивного биомаркера последующая биопсия двенадцатиперстной кишки остается единственным подходящим тестом для оценки восстановления слизистой оболочки у детей и взрослых с глютеновой болезнью.”

Границы | Улучшение теста на связывание EMA с использованием имеющихся в продаже флуоресцентных шариков

Введение

Наследственный сфероцитоз (HS) — одно из наиболее частых наследственных гемолитических заболеваний у кавказцев, поражающее приблизительно 1: 2000. Как правило, пациенты имеют гемолитическую анемию, отрицательную по прямому антиглобулиновому тесту (DAT), повышенную среднюю концентрацию корпускулярного гемоглобина (MCHC) и пальпируемую спленомегалию, а также известный семейный анамнез гемолитической анемии и болезни желчного пузыря.В тяжелых случаях переливание крови требуется с раннего детства. Спленэктомия является основным методом лечения пациентов с симптомами (Iolascon et al., 2017).

На протяжении десятилетий лабораторная диагностика HS основывалась на ручном тесте на осмотическую хрупкость (OF). Этот устаревший тест измеряет степень гемолиза после воздействия на эритроциты (эритроциты) солевого раствора с пониженным тонусом — процедура, которая является трудоемкой. Чувствительность и специфичность теста OF ограничены, и было подсчитано, что примерно 20% легких случаев HS остаются недиагностированными при использовании только теста OF (Perrotta et al., 2008). Большинство лабораторий в настоящее время заменили тест OF новыми и более технически сложными методами, такими как тест связывания эозин-5′-малеимида (EMA) на основе проточной цитометрии и эктацитометрия с осмотическим градиентом.

Осмотическая градиентная эктацитометрия — золотой стандарт измерения деформируемости эритроцитов. Однако в большинстве лабораторий до недавнего времени эктацитометрия была недоступна. Теперь доступно новое поколение эктацитометров, позволяющее применять этот диагностический принцип в более широком масштабе (Da Costa et al., 2016; Llaudet-Planas et al., 2018). Осмотическая градиентная эктацитометрия основана на анализе лазерной дифракции и позволяет напрямую и точно измерить изменения деформируемости эритроцитов при заданном напряжении сдвига. К сожалению, тест не делает различий между HS и другими сфероцитарными состояниями, такими как аутоиммунная гемолитическая анемия (Lazarova et al., 2017), и для их дифференциации требуется DAT.

В большинстве случаев HS вызывается мутациями зародышевой линии в генах, кодирующих белки цитоскелета эритроцитов, такие как α-спектрин, β-спектрин, полоса 3, анкирин и белок 4.2. Даже в этом случае предварительная генетическая диагностика редко помогает в диагностике и применяется только в индивидуальном порядке (King et al., 2015). Это связано с низкой чувствительностью, трудностями с интерпретацией выявленных — часто частных — вариантов и высокой стоимостью. В результате функциональное тестирование эритроцитов остается золотым стандартом.

Большинство лабораторий полагаются на тест связывания EMA в качестве основного скринингового теста на HS. Этот тест обеспечивает отличную чувствительность и специфичность> 86%, а часто даже> 95% (King et al., 2000; Bianchi et al., 2012; Park et al., 2014; Джоши и др., 2016; Arora et al., 2018). Принцип теста связывания EMA заключается в измерении интенсивности флуоресценции эритроцитов после инкубации с EMA; флуоресцентное вещество, которое связывается с белками, ассоциированными с мембраной эритроцитов, в основном с полосой 3 (King et al., 2004). У людей с HS уменьшенная площадь поверхности мембраны эритроцитов и, следовательно, количество полосы 3, как правило, уменьшается (Perrotta et al., 2008). Таким образом, эритроциты людей с HS можно отличить от нормальных эритроцитов по более низкой средней интенсивности флуоресценции (MFI).Тест на привязку EMA относительно прост в выполнении, а результаты доступны в течение нескольких часов. Как правило, MFI эритроцитов у лиц с подозрением на HS сравнивают с MFI нормального контроля, обычно от трех до шести здоровых людей (Hunt et al., 2015). В идеале, но не обязательно, кровь от здоровых людей должна соответствовать возрасту и браться одновременно с диагностическим образцом крови (Falay et al., 2018). К сожалению, этот подход часто неосуществим, поскольку многие лаборатории полагаются на контрольные образцы крови от доноров, сотрудников больниц и даже оставшиеся образцы крови от пациентов, считающихся гематологически здоровыми.Поиск нормального, соответствующего возрасту элемента управления может быть проблемой, особенно для детей. Использование переменных и некоммутируемых стандартных образцов значительно усложняет определение референсных диапазонов, межлабораторные сравнения и программы оценки качества (Miller et al., 2011; King et al., 2015).

В этом исследовании мы исследуем эффективность и надежность модифицированного теста связывания EMA путем замены свежих образцов крови от здоровых контролей коммерчески доступными флуоресцентными шариками, чтобы упростить диагностику HS.

Методы

Образцы

Мы включили образцы крови всех пациентов, направленных в нашу лабораторию с подозрением на HS в период с 6 февраля 2017 года по 4 сентября 2019 года. Датский центр гемоглобинопатий охватывает> 75% населения Дании и выполняет большую часть диагностики мембранопатии в стране. . Контроль за поездками в целом не включался из-за местной практики. Образцы старше 48 ч отбраковывались.

Для определения калибровочного коэффициента (CF) мы дополнительно взяли образцы крови 71 здорового участника Копенгагенского исследования общей популяции (Warny et al., 2020).

Все образцы крови были проанализированы с помощью эктацитометрии с осмотическим градиентом и теста связывания EMA, как описано ниже. Образцы транспортировали и хранили в холоде.

DAT было выполнено локально. Поскольку эктацитометрия с осмотическим градиентом не позволяет различить иммунный гемолиз и HS (Da Costa et al., 2016), мы считали пациентов с положительным DAT иммунным гемолизом. Клиническая информация была едва доступна.

Тест связывания эозин-5′-малеимида

Тест связывания EMA был проведен на крови, стабилизированной ЭДТА, в течение 48 часов после отбора пробы.Все тесты связывания EMA проводили на FACS Canto II (BD Biosciences, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США) с использованием стандартных вариантов фильтра (530/30).

Мечение эритроцитов с помощью EMA и проточной цитометрии выполняли, как ранее описано другими (King et al., 2000, 2004). Хотя вместо использования шести здоровых людей соответствующего возраста контрольной группы мы сравнили образцы с коммерчески доступными флуоресцентными шариками.

Более подробно, каждый образец был включен в EMA-эксперимент, который, помимо двух контрольных образцов, также включал два типа коммерчески доступных флуоресцентных шариков.Во-первых, одна капля шариков FluoroSpheres K0110 (калибровочные шарики; Agilent Technologies Inc., Пало-Альто, Калифорния, США), разведенных в 500 мкл фосфатно-солевого буфера (PBS), использовалась в каждом эксперименте для калибровки настройки фотоумножителя. проточный цитометр на постоянное значение. Это было сделано для обеспечения сопоставимости уровня флуоресценции во всех экспериментах. Во-вторых, каждый образец сравнивали с одной каплей бусинок FL1 Rainbow Fluorescent Particle среднего класса (Rainbow beads; BD Biosciences), разведенных в 500 мкл PBS.

Эозин-5′-малеимид для отдельного пациента был рассчитан как:

EMAbeads (%) = (1-MFIpatientMFIrainbow × CF) × 100%

Rainbow bead MFI был немного выше, чем средний уровень флуоресценции контролей. Таким образом, постоянный CF был рассчитан на основе среднего значения контрольных образцов от 71 здорового человека:

CF = Среднее⁢ (MFIhealthycontrolsMFIrainbow)

Причина этого CF заключается исключительно в том, чтобы гарантировать, что полученное значение EMA можно сравнить со значениями EMA, указанными в литературе.Новые партии радужных бусинок должны быть откалиброваны по отношению к предыдущей, чтобы обеспечить согласованность вычисленных значений EMA. В противном случае следует рассчитать новый CF.

Два здоровых контроля обычно включались в каждый образец в качестве дополнительной меры безопасности, и более традиционное значение EMA было рассчитано с использованием следующих параметров:

EMAcontrols (%) = (1-MFIpatientMean⁢ (MFIcontrol1 + MFIcontrol2)) × 100%

Следовательно, значение EMA для элементов управления было рассчитано с использованием только двух элементов управления, в отличие от шести обычно используемых.

Подробный пошаговый протокол находится в свободном доступе в Интернете по адресу https://www.protocols.io/view/eosin-5-maleimide-ema-binding-test-with-fluorecent-bigdkbs6 (Glenthøj and Petersen, 2020) .

Осмотическая градиентная эктацитометрия

Осмотическая градиентная эктацитометрия была выполнена в течение 48 часов после отбора проб. Все анализы были выполнены на эктацитометре LoRRca (RR Mechatronics, Zwaag, Нидерланды), как описано ранее (Da Costa et al., 2016).

Статистический анализ

Мы использовали линейную регрессию с корреляцией Пирсона для оценки линейного моделирования.Мы использовали точный критерий Фишера для сравнения исходных характеристик категориальных переменных и знаковый ранговый критерий Уилкоксона для сравнения числовых переменных. Статистический анализ проводился в версии 4.0.0 R (R Core Team, 2017) с использованием пакета ggplot2 для диаграмм, базовых характеристик tableone, пакетов pROC (Robin et al., 2011) и plotROC для анализа рабочих характеристик приемника (ROC). , и пакет каретки для расчетов точности.

Результаты

EMA с флуоресцентными шариками в контроле для здоровья

Характеристики 71 контрольного субъекта из Копенгагенского общего исследования населения показаны в таблице 1.Образцы крови здоровых контролей были подвергнуты тесту связывания EMA с радужными шариками и эктацитометрии с осмотическим градиентом (рис. 1A). Ни EMA (уменьшение MFI), ни эктацитометрия осмотического градиента [снижение осмотического сопротивления и индекса удлинения (Llaudet-Planas et al., 2018)] не указали на мембранопатию ни у одного из 71 субъекта по сравнению с другими 70 субъектами (данные не показаны) . Среднее значение MFI в контроле было 12 068 ± 599 (стандартное отклонение), а среднее значение MFI rainbow было 14 900 ± 96 (стандартное отклонение).Таким образом, CF составил 0,81 (12 068/14 900).

Таблица 1. Характеристики здоровых людей из контрольной группы из Копенгагенского общего исследования населения, использованные для расчета калибровочного коэффициента, а также 289 пациентов с образцами, отправленными в нашу лабораторию для диагностики наследственного сфероцитоза (HS).

Рис. 1. Схема исследования (A) Здоровые субъекты, участвующие в Копенгагенском общем популяционном исследовании, были подвергнуты эктацитометрии с осмотическим градиентом и тесту связывания EMA с радужными шариками.Этих субъектов использовали только для расчета постоянного калибровочного коэффициента (CF), нормализующего среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) радужных шариков к среднему значению для здоровых контролей. (B) 289 пациентов получили образцы, отправленные в нашу лабораторию с подозрением на наследственный сфероцитоз (HS). Был проведен тест связывания EMA и эктацитометрия с осмотическим градиентом. Пациенты без положительного прямого теста на антиглобулин и сфероцитоза на эктацитометрии с осмотическим градиентом были помечены как HS для проверки точности теста EMA.

EMA с флуоресцентными шариками для диагностики HS

Мы включили образцы крови 289 человек с подозрением на ГВ. В соответствии с нашей неспособностью найти контрольные группы соответствующего возраста, люди с подозрением на ГВ были значительно моложе здоровых контролей (Таблица 1). DAT был доступен 187 из 289 пациентов (64,7%). На основании эктацитометрии с осмотическим градиентом [снижение осмотического сопротивления, снижение индекса удлинения и отсутствие положительных результатов DAT (Llaudet-Planas et al., 2018)] у 112 человек был диагностирован HS (Рисунок 1B).Характеристики пациентов суммированы в таблице 1. Пациенты с HS были значительно моложе с меньшим количеством доступных DAT по сравнению с людьми без HS.

Линейность флуоресценции оценивалась путем изменения фотоумножителя в настройках проточного цитометра для изменения MFI пациента от стандартного значения до 0,1 и 10-кратного этого значения. Разница в соотношении MFI пациент / MFI rainbow была незначительной в этом диапазоне, что указывает на то, что минутная регулировка фотоумножителя может не потребоваться (данные не показаны).

Сравнение гранул EMA и традиционных контролей EMA показало отличную корреляцию между двумя методами [Рисунок 2; Коэффициент корреляции Пирсона = 0,93 (95% ДИ: 0,91–0,94)].

Рисунок 2. (A) Сравнение EMA с использованием двух элементов управления и EMA с использованием радужных шариков. Корреляция Пирсона (R) изображена в верхнем левом углу. Цвет указывает на диагноз наследственного сфероцитоза (HS) с помощью эктацитометрии с осмотическим градиентом (рис. 1B). (B) Модифицированный график Бланда-Альтмана для EMA с использованием двух контролей против EMA с использованием радужных шариков. Единица измерения на обеих осях — это средняя интенсивность флуоресценции в процентах по сравнению со здоровым контролем. Полосатые линии обозначают среднее значение и 1,96 стандартного отклонения выше и ниже этого. Гистограммы нанесены на верхнюю и правую оси.

Анализ рабочих характеристик приемника был выполнен для шариков EMA и EMA для контроля (рис. 3) с оптимальным значением отсечки -11,6 и -9.7% соответственно (рис. 2А). Бусины радуги показали немного лучшую специфичность, положительную прогностическую ценность и точность по сравнению с использованием двух здоровых контролей (таблицы 2, 3).

Рис. 3. Кривые рабочих характеристик приемника (ROC) для теста связывания EMA с помощью двух контрольных (красный) или радужных шариков (синий) с использованием эктацитометрии с осмотическим градиентом в качестве золотого стандарта (рис. 1B).

Таблица 2. Матрица ошибок для теста связывания EMA с (A), радужными шариками или (B) с двумя контролями.

Таблица 3. Чувствительность, специфичность, положительная прогностическая ценность (PPV), отрицательная прогностическая ценность (NPV) и точность теста связывания EMA с радужными шариками или двумя контролями.

MFI двух контролей различались более чем на 1000 у 87 пациентов, что могло вызвать низкую производительность при вычислении EMA контрольных образцов . После исключения этих пациентов мы не обнаружили существенных изменений в корреляции между гранулами EMA и EMA контрольными [дополнительный рисунок S1; Коэффициент корреляции Пирсона = 0.95 (95% ДИ: 0,93–0,98)], анализ ROC (дополнительный рисунок S2) или точность EMA контролирует тест (дополнительные таблицы S1, S2).

Обсуждение

В этом исследовании мы оценили, могут ли коммерчески доступные флуоресцентные шарики заменить потребность в многочисленных контрольных образцах в тесте связывания EMA с целью упрощения диагностики HS. Наша лаборатория, и, вероятно, многие другие лаборатории, изо всех сил пытаются найти подходящие контрольные образцы для теста EMA, и даже с контролями, соответствующими возрасту, вариации часто бывают значительными.Флуоресцентные шарики легко доступны и могут облегчить межлабораторные сравнения, а также программы оценки качества без потенциальных ошибок, связанных с использованием контролей.

Используя флуоресцентные шарики, мы демонстрируем, что тест связывания EMA без легкодоступных здоровых контролей возможен и не уступает традиционному подходу (рисунок 2 и таблицы 2, 3). Мы решили включить CF, который переводит соотношение EMA между MFI пациента и радужными шариками в значения, знакомые по традиционному тесту связывания EMA.Теоретически в этом нет необходимости, и нескорректированное соотношение MFI между пациентом и радужными бусинами также можно использовать для диагностики.

В связи с нашей десятилетней стандартной практикой использования флуоресцентных шариков EMA, мы используем только два контрольных параметра для здоровья в качестве дополнительного контроля безопасности. Поскольку обычно используются от трех до шести контролей, это могло ослабить эффективность традиционного теста EMA в данном исследовании (Hunt et al., 2015). Мы попытались свести к минимуму эту слабость в нашем исследовании, удалив пациентов, контроль которых значительно отличался.Это не повлияло существенно на наши результаты (дополнительные рисунки S1, S2 и таблица S1). Кроме того, клиническая информация, которая могла бы помочь в диагностике HS, обычно отсутствовала. Таким образом, для целей настоящего исследования эталонный диагноз HS был основан на эктацитометрии с осмотическим градиентом, дополненной локально выполненной DAT (Llaudet-Planas et al., 2018). Дифференциальный диагноз включает иммунный гемолиз, избегающий выявления традиционными DAT и не-HS мембранопатиями, такими как врожденная дизеритропоэтическая анемия типа II.Тем не менее, цель нашего исследования состояла не в том, чтобы закрепить уже установленную диагностическую чувствительность и специфичность теста связывания EMA (Bianchi et al., 2012), а в том, чтобы продемонстрировать не худший подход к тесту EMA, в котором здоровые контрольные люди заменяются коммерчески доступными флуоресцентными шариками.

Хотя замена контрольных образцов флуоресцентными шариками является привлекательной альтернативой, этот подход требует регулярной калибровки, чтобы гарантировать, что соотношение между шариками и здоровым контролем не изменится.Мы регулярно проводим такие проверки после смены партии флуоресцентных шариков или EMA. Флуоресценция красителя EMA должна быть стабильной до 6 месяцев при -80 ° C (Mehra et al., 2015). В нашей диагностической установке более легко осуществить получение здоровых средств контроля для проверок качества, запланированных с интервалом в несколько месяцев, чем получение подходящих средств контроля для каждого теста связывания EMA. Это особенно сложно с маленькими пациентами, и мы подозреваем, что многие другие лаборатории испытывают аналогичные трудности с получением контрольной крови соответствующего возраста от здоровых детей.

В заключение, наши результаты показывают, что коммерчески доступные флуоресцентные шарики могут устранить необходимость в образцах здоровых контролей в тесте связывания EMA без ущерба для производительности теста. Эти результаты требуют внешней проверки перед использованием в клинической практике.

Заявление о доступности данных

Необработанные данные, подтверждающие выводы этой статьи, будут предоставлены авторами без излишних оговорок.

Заявление об этике

Кровь здоровых людей из контрольной группы из Копенгагенского исследования общей популяции использовалась в соответствии с одобрением Датского этического комитета (H-KF-01–144 / 01).Письменное информированное согласие было получено от всех участников. Все пациенты или их родители дали согласие на диагностические тесты на гемолитическую анемию, включая тесты на наследственный сфероцитоз. Данные хранились и обрабатывались в соответствии с разрешением Датского агентства по защите данных (10122009 HEH-L.HB).

Взносы авторов

HB, AN-M, JP и AG запланировали это исследование. JP выполнила EMA и эктацитометрический анализ. AS, CB, JP и AG выполнили статистический анализ. AG и JP проанализировали данные и написали рукопись.AG подготовила цифры. Все авторы внесли свой вклад в окончательную утвержденную версию этого отчета.

Финансирование

Исследование финансировалось Датским центром гемоглобинопатий.

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https: // www.frontiersin.org/articles/10.3389/fphys.2020.569289/full#supplementary-material

РИСУНОК S1 | 87 из 289 пациентов имели контрольную группу со средней разницей интенсивности флуоресценции> 1000 и были исключены. (A) Сравнение EMA с использованием двух контролей и EMA с использованием радужных шариков. Корреляция Пирсона (R) изображена в верхнем левом углу. Цвет указывает на диагноз наследственного сфероцитоза (HS) с помощью эктацитометрии с осмотическим градиентом (рис. 1B). (B) Модифицированный график Бланда-Альтмана для EMA с использованием двух контрольных иEMA с использованием радужных бусин. Единица измерения на обеих осях — это средняя интенсивность флуоресценции в процентах по сравнению со здоровым контролем. Полосатые линии обозначают среднее значение и 1,96 стандартного отклонения выше и ниже этого. Гистограммы нанесены на верхнюю и правую оси.

РИСУНОК S2 | Кривые рабочих характеристик приемника (ROC) для теста связывания EMA либо двух контрольных образцов, либо радужных шариков с использованием эктацитометрии с осмотическим градиентом в качестве золотого стандарта (рис. 1B). 87 из 289 пациентов имели контрольную группу со средней разницей интенсивности флуоресценции> 1000 и были исключены.

ТАБЛИЦА S1 | Матрица путаницы для теста связывания EMA либо с (A), радужными шариками, либо с двумя контролями (B) . В отличие от таблицы 2, пациенты, у которых контрольная группа различалась больше всего по средней разнице интенсивности флуоресценции (> 1000; 87 из 289 пациентов), были исключены.

ТАБЛИЦА S2 | Чувствительность, специфичность, положительная прогностическая ценность (PPV), отрицательная прогностическая ценность (NPV) и точность для теста EMA с радужными шариками или двумя контролями для теста связывания EMA с радужными шариками или двумя контролями у пациентов.В отличие от таблицы 3, пациенты, у которых контрольная группа различалась больше всего по средней разнице интенсивности флуоресценции (> 1000; 87 из 289 пациентов), были исключены.

Список литературы

Арора, Р. Д., Дасс, Дж., Майдео, С., Арья, В., Радхакришнан, Н., Сачдева, А., и др. (2018). Проточный цитометрический тест на осмотическую хрупкость и тесты на связывание эозин-5′-малеимида с красителем лучше, чем обычные тесты на осмотическую хрупкость для диагностики наследственного сфероцитоза. Внутр. J. Lab. Гематол. 40, 335–342. DOI: 10.1111 / ijlh.12794

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бьянки П., Фермо Э., Верчеллати К., Марчелло А. П., Порретти Л., Кортелецци А. и др. (2012). Диагностическая сила лабораторных тестов наследственного сфероцитоза: сравнительное исследование с участием 150 пациентов, сгруппированных по молекулярным и клиническим характеристикам. Haematologica 97, 516–523. DOI: 10.3324 / haematol.2011.052845

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Да Коста, Л., Suner, L., Galimand, J., Bonnel, A., Pascreau, T., Couque, N., et al. (2016). Инструмент диагностики нарушений мембран эритроцитов: оценка эктацитометра нового поколения. Blood Cells Mol. Дис. 56, 9–22. DOI: 10.1016 / j.bcmd.2015.09.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фалай М., Улусан Г. Э., Шенес М. и Акар И. О. (2018). Являются ли референсные диапазоны и пороговые значения теста связывания эозин-5′-малеимида (EMA) для наследственного сфероцитоза специфичными для каждой возрастной группы? Clin.Лаборатория. 64, 1101–1103. DOI: 10.7754 / Clin.Lab.2018.180124

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хант, Л., Гринвуд, Д., Хеймпель, Х., Ноэль, Н., Уайтуэй, А., и Кинг, М. Дж. (2015). К гармонизации представления результатов теста связывания эозин-5′-малеимида в диагностике наследственного сфероцитоза. Cytom. Часть B Clin. Cytom. 88, 50–57. DOI: 10.1002 / cyto.b.21187

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Иоласкон, А., Андольфо, И., Барчеллини, В., Корчоне, Ф., Гарсон, Л., Де Франчески, Л. и др. (2017). Рекомендации по спленэктомии при наследственных гемолитических анемиях. Haematologica 102, 1304–1313. DOI: 10.3324 / haematol.2016.161166

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джоши П., Аггарвал А., Джамвал М., Сачдева М. Ю. С., Бансал Д., Малхотра П. и др. (2016). Сравнительная оценка проточной цитометрии эозин-5′-малеимида показывает высокую диагностическую эффективность наследственного сфероцитоза. Внутр. J. Lab. Гематол. 38, 520–526. DOI: 10.1111 / ijlh.12533 ​​

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кинг, М. Дж., Беренс, Дж., Роджерс, К., Флинн, К., Гринвуд, Д., и Чемберс, К. (2000). Экспресс-проточный цитометрический тест для диагностики гемолитической анемии, связанной с мембранным цитоскелетом. Br. J. Haematol. 111, 924–933. DOI: 10.1046 / j.1365-2141.2000.02416.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кинг, М.Дж., Гарсон, Л., Хойер, Дж. Д., Иоласкон, А., Пикард, В., Стюарт, Г. и др. (2015). Руководство ICSH по лабораторной диагностике неиммунных наследственных нарушений мембран эритроцитов. Внутр. J. Lab. Гематол. 37, 304–325. DOI: 10.1111 / ijlh.12335

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кинг, М. Дж., Смайт, Дж. С. и Мушенс, Р. (2004). Связывание эозин-5-малеимида с группой 3 и Rh-родственными белками составляет основу скринингового теста на наследственный сфероцитоз. Br. J. Haematol. 124, 106–113. DOI: 10.1046 / j.1365-2141.2003.04730.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лазарова, Э., Гулбис, Б., Оиршот, Б., и Ван Вейк, Р. (2017). Эктацитометрия с осмотическим градиентом нового поколения для диагностики наследственного сфероцитоза: межлабораторная валидация и опыт. Clin. Chem. Лаборатория. Med. 55, 394–402. DOI: 10.1515 / cclm-2016-0290

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Llaudet-Planas, E., Вивес-Корронс, Дж. Л., Риццуто, В., Гомес-Рамирес, П., Севилья Наварро, Дж., Колл Сибина, М. Т. и др. (2018). Осмотическая градиентная эктацитометрия: ценный скрининговый тест на наследственный сфероцитоз и другие нарушения мембран эритроцитов. Внутр. J. Lab. Гематол. 40, 94–102. DOI: 10.1111 / ijlh.12746

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мехра, С., Тьяги, Н., Дорвал, П., Панде, А., Джайн, Д., Сачдев, Р. и др. (2015). Стабильность красителя эозин-5′-малеимида, используемого в проточном цитометрическом анализе нарушений мембран эритроцитов. Blood Res. 50, 109–112. DOI: 10.5045 / br.2015.50.2.109

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миллер, В. Г., Майерс, Г. Л., Ганцер, М., Лу Кан, С. Э., Шенбруннер, Э. Р., Тьенпонт, Л. М. и др. (2011). Дорожная карта по гармонизации процедур клинических лабораторных измерений. Clin. Chem. 57, 1108–1117. DOI: 10.1373 / Clinchem.2011.164012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Парк, С.Х., Пак, К. Дж., Ли, Б. Р., Чо, Ю. У., Янг, С., Ким, Н. и др. (2014). Сравнительное исследование теста связывания эозин-5′-малеимида, теста на осмотическую хрупкость проточной цитометрии и теста криогемолиза в диагностике наследственного сфероцитоза. Am. J. Clin. Патол. 142, 474–484. DOI: 10.1309 / AJCPO7V4OGXLIIPP

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Перротта С., Галлахер П. Г. и Мохандас Н. (2008). Наследственный сфероцитоз. Ланцет 372, 1411–1426.DOI: 10.1016 / S0140-6736 (08) 61588-61583

CrossRef Полный текст | Google Scholar

R Основная команда (2017). R: язык и среда для статистических вычислений. Вена: Фонд R для статистических вычислений.

Google Scholar

Робин X., Терк Н., Хайнард А., Тиберти Н., Лизачек Ф., Санчес Дж. К. и др. (2011). pROC: пакет с открытым исходным кодом для R и S + для анализа и сравнения кривых ROC. BMC Bioinform. 12:77. DOI: 10.1186 / 1471-2105-12-77

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Варни М., Хелби Дж., Нордестгаард Б. Г., Биргенс Х. и Бойесен С. Э. (2020). Побочная лимфопения и смертность: проспективное когортное исследование. CMAJ 192, E25 – E33. DOI: 10.1503 / cmaj.191024

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стоимость теста

EMA | Стоимость теста Quest

EMA | Квест — Найдите лабораторные тесты в Интернете

Стоимость теста EMA в интернет-магазинах лабораторных тестов

Если у вас более одного теста — добавляйте их по одному.

Лабораторные исследования поиск по реквизитам

Скрининг эндомизиальных антител (IgA) с рефлексом на титр (тест) (Удалить)

Магазины: Personalabs, RequestATest, True Health Labs, Walk-In Lab

Квест-тест: 15064 (Квест)
Компоненты: Endomysial Ab IgA

Стоимость теста EMA Минимум есть в Personalabs (Endomysial Antibody, IgA Blood Test) по цене 140 долларов.00. Стоимость теста EMA max находится в RequestATest (Endomysial Antibody, IgA Blood Test) по цене 169 долларов США. Этот лабораторный тест доступен в 4 онлайн-магазинах лабораторных тестов.

  • Покрытые тесты: Скрининг эндомизиальных антител (IgA) с рефлексом на титр (Квест)

    Покрытые компоненты: Эндомизиальные антитела IgA

    Штаты, занесенные в черный список: Нью-Джерси, Род-Айленд, Нью-Йорк

    140 долларов.00

    Заказ от Personalabs

    Шаг 1 : Добавить в корзину — для каждой панели ниже нажмите кнопку «Купить в Интернете». Это откроется в новом таб. Нажмите там кнопку «Добавить в корзину» и закройте вкладку.
    • Нажмите «Купить в Интернете». затем в новой вкладке нажмите кнопку «Добавить в корзину». Закройте вкладку.(Эндомизиальные антитела, анализ крови на IgA $ 140,00)
    Шаг 2 : Оформить заказ — перейдите к Проверить и завершите процесс оформления заказа. Ваша общая цена должна быть 140,00 долл. США
  • Покрытые тесты: Скрининг эндомизиальных антител (IgA) с рефлексом на титр (Квест)

    Покрытые компоненты: Эндомизиальные антитела IgA

    Штаты, занесенные в черный список: Нью-Йорк, Нью-Джерси, Массачусетс, Род-Айленд

    159 долларов.00

    Заказ от True Health Labs

    Шаг 1 : Добавить в корзину — для каждой панели ниже нажмите кнопку «Купить в Интернете». Это откроется в новом таб. Нажмите там кнопку «Добавить в корзину» и закройте вкладку.
    • Нажмите «Купить в Интернете». затем в новой вкладке нажмите кнопку «Добавить в корзину». Закройте вкладку.(Эндомизиальные антитела, IgA $ 159,00)
    Шаг 2 : Оформить заказ — перейдите к Проверить и завершите процесс оформления заказа. Ваша общая цена должна быть 159,00 долл. США
  • Покрытые тесты: Скрининг эндомизиальных антител (IgA) с рефлексом на титр (Квест)

    Покрытые компоненты: Эндомизиальные антитела IgA

    Штаты, занесенные в черный список: Нью-Йорк, Нью-Джерси, Род-Айленд

    168 долларов.00

    Заказ из Walk-In Lab

    Шаг 1 : Добавить в корзину — для каждой панели ниже нажмите кнопку «Купить в Интернете». Это откроется в новом таб. Нажмите там кнопку «Добавить в корзину» и закройте вкладку.
    • Нажмите «Купить в Интернете». затем в новой вкладке нажмите кнопку «Добавить в корзину». Закройте вкладку.(Анализ крови на эндомизиальные антитела, IgA $ 168,00)
    Шаг 2 : Оформить заказ — перейдите к Проверить и завершите процесс оформления заказа. Ваша общая цена должна быть 168,00 долларов США
  • Покрытые тесты: Скрининг эндомизиальных антител (IgA) с рефлексом на титр (Квест)

    Покрытые компоненты: Эндомизиальные антитела IgA

    Штаты, занесенные в черный список: Нью-Йорк, Нью-Джерси, Род-Айленд

    169 долларов.00

    Заказ из RequestATest

    Шаг 1 : Добавить в корзину — для каждой панели ниже нажмите кнопку «Добавить в корзину», а затем закройте новую таб.
    • Нажмите «Добавить в корзину» затем закройте новую вкладку (Endomysial Antibody, IgA Blood Test $ 169.00)
    Шаг 2 : Оформить заказ — перейдите к Проверить и завершите процесс оформления заказа.Ваша общая цена должна быть 169,00 долл. США
  • Покрытые компоненты: Эндомизиальные антитела IgA

    Штаты, занесенные в черный список: Нью-Йорк, Нью-Джерси, Род-Айленд

    265 долларов.00

    Заказ из RequestATest

    Шаг 1 : Добавить в корзину — для каждой панели ниже нажмите кнопку «Добавить в корзину», а затем закройте новую таб.
    • Нажмите «Добавить в корзину» затем закройте новую вкладку (Панель по глютеновой болезни $ 265,00)
    Шаг 2 : Оформить заказ — перейдите к Проверить и завершите процесс оформления заказа.Ваша общая цена должна быть 265,00 долларов США
  • Покрытые компоненты: Эндомизиальные антитела IgA

    Штаты, занесенные в черный список: Нью-Йорк, Нью-Джерси, Массачусетс, Род-Айленд

    299 долларов.00

    Заказ от True Health Labs

    Шаг 1 : Добавить в корзину — для каждой панели ниже нажмите кнопку «Купить в Интернете». Это откроется в новом таб. Нажмите там кнопку «Добавить в корзину» и закройте вкладку.
    • Нажмите «Купить в Интернете». затем в новой вкладке нажмите кнопку «Добавить в корзину». Закройте вкладку.(Тестовая панель на целиакию $ 299,00)
    Шаг 2 : Оформить заказ — перейдите к Проверить и завершите процесс оформления заказа. Ваша общая цена должна быть 299,00 долл. США

Скрининг эндомизиальных антител (IgA) с рефлекс-тестом на титрование Краткая информация

Скрининг эндомизиальных антител (IgA) с рефлексом на титрование Процедура лабораторного теста Код CPT: 86255

Скрининг на следующие состояния: целиакия, аутоиммунные заболевания, недоедание, мальабсорбция, остеопороз, непереносимость лактозы, воспалительное заболевание кишечника, диарея, синдром Дауна

Понимание результатов лабораторных тестов

Посетите страницу о целиакии на сайт, связанный с Американской ассоциацией клинической химии (AACC), для лучшего понимания тестов.Там вы найдете самую подробную и полную информацию о лабораторных исследованиях. Во вкладке «Общие вопросы» вы найдете ответы на самые частые вопросы.

Кроме того, вы можете воспользоваться специальной формой, чтобы задать вопрос. Это полезно, если на сайте нет ответа на ваш вопрос. На ваш вопрос ответит лаборант. Это часть добровольных услуг, предоставляемых Американским обществом клинических лабораторных исследований.

Лабораторные тесты, относящиеся к скринингу на эндомизиальные антитела (IgA) с рефлексом на определение титра:

Информация на этом веб-сайте не предназначена для использования в целях самодиагностики / самолечения.Он предназначен только для информационных целей. Перед заказом любого из лабораторных исследований, представленных на сайте, обратитесь к врачу. Также врач несет ответственность за лечение после получения результатов анализов. Find Lab Test не поддерживает какую-либо конкретную клиническую лабораторию или лабораторные тесты, предлагаемые на сайте. Мы также не предоставляем никаких гарантий в отношении данных о ценах, связанных с этими тестами. Все товарные знаки, изображения, защищенные авторским правом, бренды и логотипы являются собственностью их владельцев и правообладателей.Они предназначены только для представления продуктов на этом веб-сайте.

Анализы крови на целиакию

Анализы крови необходимы для выявления целиакии. Большинство из них предназначены для обнаружения иммуноглобулина (Ig), антитела, вырабатываемого иммунной системой людей с целиакией в ответ на глютен, содержащийся в пшенице и других зернах. Другие анализы крови ищут другие индикаторы, включая белок, связывающий жирные кислоты (I-FABP), и определенные генетические индикаторы.

Tetra Images / Getty Images

Результаты анализа крови на целиакию обычно возвращаются в течение одного-трех дней.Результаты генетических тестов на эндомизиальные антитела (EMA) и целиакии могут занять больше времени. При положительном результате глютенового анализа крови необходимо дальнейшее обследование. Единственный способ окончательно диагностировать целиакию — провести биопсию тонкой кишки для выявления повреждений ткани.

Тесты на антитела

Существует четыре теста на антитела к целиакии. Самый чувствительный скрининг на иммуноглобулин А (IgA) — антитела, наиболее заметные при глютеновой болезни. Людей с дефицитом IgA (особенно с аутоиммунными заболеваниями, такими как волчанка или ревматоидный артрит, можно тестировать на иммуноглобулин G (IgG), а не на IgA .

Чтобы анализ крови на антитела для скрининга на целиакию был точным, обследуемый должен есть глютен во время обследования.

Тканевая трансглутаминаза (тТГ)

Тест tTG, также известный как тест против тканевой трансглутаминазы или anti-tTG, является вариантом первой линии для тестирования на антитела. tTG — это фермент, который играет роль в заживлении ран, межклеточной адгезии, регуляции выживаемости и гибели клеток и других биологических процессах.

Он также участвует в расщеплении глиадина — водорастворимого белка в глютене, необходимого для подъема хлеба во время выпечки и легко усваиваемого кишечником.

Взаимодействие между tTG и глиадинами сложное. После того, как тТГ расщепляет глютен, последующее расщепление глиадинов в кровотоке активирует тТГ в тонком кишечнике, вызывая повышение уровня ферментов. В ответ иммунная система вырабатывает защитные антитела к тТГ, которые можно обнаружить с помощью теста тТГ.

Деамидированный пептид глиадина (DGP)

Деамидированный глиадин вырабатывается, когда tTG расщепляет глиадин в пищеварительном тракте. У людей с глютеновой болезнью этот ответ усиливается и является ключевым маркером заболевания.

Тест на деамидированный глиадиновый пептид (DGP) способен обнаруживать деамидированный глиадин IgA со специфичностью 94%, но не идеальной чувствительностью 74%. Из-за этого его чаще всего используют в тандеме с тестом tTG. для получения ранних свидетельств глютеновой болезни, особенно у детей в возрасте 2 лет, у которых иммунная система еще не полностью развита.

Эндомизиальные антитела (EMA)

Эндомизиальные антитела вырабатываются в слое ткани, окружающем мышцы, называемом эндомизием, который содержит форму tTG, которая при воздействии глютена активирует и выделяет антитела в результате аутоиммунного ответа.

Тест на эндомизиальные антитела (EMA) значительно более точен, чем тест tTG или DGP. Он также более сложен и дорог: поскольку антитела связываются с гладкими мышцами, замороженная ткань пищевода или пуповины необходима для извлечения антител из образец крови в достаточно высоких концентрациях, чтобы получить точный результат.

Тест EMA в основном используется для обнаружения антител IgA, хотя также доступна версия IgG.

Общий сывороточный IgA

Общий анализ сывороточного IgA используется для проверки дефицита IgA, который может вызывать ложноотрицательные показания tTG-IgA или EMA. Его часто используют, когда человек дает отрицательный результат по одному или обоим из этих тестов. В других случаях его проводят вместе с tTG, чтобы установить, есть ли некоторая степень дефицита IgA, которая в противном случае могла бы повлиять на результаты.

Если общий анализ сывороточного IgA выявляет дефицит IgA, за ним, скорее всего, последуют либо тест DGP-IgG, либо тест tTG-IgG.

Обсуждение для врачей, занимающихся глютеновой болезнью,

Получите наше распечатанное руководство к следующему визиту к врачу, которое поможет вам задать правильные вопросы.

Отправить руководство по электронной почте

Отправить себе или любимому человеку.

Зарегистрироваться

Это руководство для обсуждения с доктором отправлено на адрес {{form.email}}.

Произошла ошибка.Пожалуйста, попробуйте еще раз.

Другие анализы крови

Помимо тестов на наличие антител на целиакию, есть еще два анализа крови, которые могут быть выполнены до того, как будет рассматриваться вопрос о биопсии кишечника.

Белок, связывающий жирные кислоты кишечника (I-FABP)

Тест I-FABP обнаруживает белок, который выделяется в кровь всякий раз, когда кишечник поврежден, что характерно для целиакии. Повышение уровня I-FAGP в крови может свидетельствовать о глютеновой болезни, даже если тесты на антитела неубедительны.Образцы мочи также могут быть проверены на I-FABP.

Генетическое исследование целиакии

Генетическое тестирование целиакии, также известное как HLA-типирование, способно обнаружить генные комплексы, называемые человеческими лейкоцитарными антигенами (HLA), которые могут предрасполагать человека к целиакии, а именно HLA-DQ2 и HLA-DQ8.

Положительный результат генетического теста не означает, что у вас глютеновая болезнь — поскольку 55% ​​населения в целом имеют HLA-DQ2 и HLA-DQ8 по сравнению с 98% населения целиакии — но он может исключить целиакию как причину, если ни один из антигенов не обнаружен.

.
Эма тест: Страница не найдена | Национальное общество детских гематологов и онкологов

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.

Пролистать наверх